Cellule protocole de lyse pour la protéine Isolation

petites protéines peut être préparé par synthèse , mais pour de nombreuses raisons , il n'existe pas de mécanisme de synthèse de mieux que la cellule elle-même . En général, la première étape de l'isolement de la protéine est la lyse cellulaire. La
lyse cellulaire Dans la lyse cellulaire , la membrane autour des ruptures de cellules .

Le mot " lyse " vient d'une racine grecque signifiant " pour desserrer . " La lyse des cellules , les forces de maintien de la membrane cellulaire ensemble sont perturbées , ce qui provoque sa rupture. Le contenu de la cellule sont ensuite libérés dans la solution environnante , y compris la protéine d'intérêt . Habituellement, cela se fait par l'addition d' une solution chimique appelée tampon de lyse.
Préparation Lysis Buffer
Le choix d' un tampon de lyse dépendra du type de cellule , la protéine et l'application .

Une myriade de solutions de lyse différents sont disponibles dans le commerce , ou des recettes communs peuvent être utilisés pour préparer un tampon de lyse à partir de produits chimiques courants . Le meilleur tampon à utiliser varie en fonction du type de cellules utilisé , la protéine à isoler et l'application finale, mais , en général , une solution de lyse contient une molécule de détergent ( souvent NP-40 ou Triton- X ) qui dissout la cellule membrane , avec des tampons, des chélateurs et des inhibiteurs de la protéase pour empêcher la protéine d'être endommagé une fois libérés de l'environnement protecteur de la cellule .

Lysis Conditions
lyse spectacle sous conditions glacées empêche des dommages à la protéine d'intérêt . Le tampon de lyse est habituellement utilisé

refroidi à la glace , et le processus de lyse est laissée se dérouler dans des conditions froides. La solution est secoué doucement pour favoriser une dispersion uniforme des cellules et des produits de lyse . Après environ 5 à 10 minutes , la solution de lyse est habituellement neutralisé pour empêcher toute autre activité . Ces précautions réduisent les dommages à la protéine et de réduire la quantité de débris étrangers produit qui sera plus tard être retiré .
Autres méthodes de lyse
vigueur mécanique peut également être utilisé pour lyser les cellules .

Bien lyse chimique est le plus doux et le plus couramment utilisé , plus sévères méthodes mécaniques pour la lyse des cellules peuvent être utilisées dans certains cas . Il s'agit notamment de traitement aux ultrasons , des cycles répétés de congélation-décongélation et homogénéisation , qui est un procédé d'empâtage . Consulter la documentation technique pour trouver la méthode la plus appropriée pour votre cas spécifique .