Conseils de culture tissulaire

La culture tissulaire est la propagation de cellules dans un milieu de croissance liquide dans le laboratoire à des fins diverses scientifiques. Par exemple, des cultures de tissus sont utilisés dans le diagnostic d'une maladie génétique , en tant que milieu pour la culture d'agents pathogènes intracellulaires tels que des bactéries ou des virus ou des investigations sur les cellules elles-mêmes . Les cellules de culture de tissu

Certaines cellules adhèrent au fond des boîtes de Pétri ou restent en suspension dans le liquide . Les cellules peuvent être d'origine végétale ou animale . Les cellules utilisées dans les cultures de tissus peuvent être des cellules primaires , ce qui signifie qu'ils ont été récoltés directement à partir d'un organisme ou d'une lignée cellulaire qui a été maintenue en culture . Les lignées cellulaires sont souvent les cellules cancéreuses , et cela doit être pris en considération lors de la planification ou de l'interprétation des expériences .
Traiter les cellules doucement

cellules adhérentes sont retirés de leur boîte de Pétri pour le passage par raclage ou avec une protéase , en général la trypsine et d'EDTA . Grattage tue de nombreuses cellules et doit être utilisé uniquement lors de la préparation des lysats cellulaires (préparations liquides de contenu de la cellule d'analyse ) ou lorsque la trypsine /EDTA doit absolument être évitée.

La trypsine enlève non seulement les protéines qui adhèrent cellules à l'antenne mais la plupart des autres protéines sur la membrane de la cellule , aussi. Cellules ballon et prendre un certain temps , généralement pendant la nuit , pour rétablir un lien avec le plat . L'ajout d' une quantité minimale de trypsine - environ 1 ml pour un flacon de 25cm2 - en faisant tourner la fiole pendant cinq secondes ou moins à la couche monocouche et ensuite décanter ou aspirer l' excès de trypsine réduira la quantité de trypsine dans laquelle la monocouche est exposée. Laissez les cellules reposent dans l'incubateur pendant la trypsine .

Après que les cellules glissent le fond du plat , ajouter les médias avec le sérum et aspirer le lysat de haut en bas la pipette doucement . Laisser un peu les médias restent dans le plat que vous pipette de haut en bas plusieurs fois pour séparer les morceaux et obtenir une suspension homogène.

Ne pas aspirer des bulles dans la pipette . Aussi, ne pas mélanger vigoureusement ou vortex de la suspension cellulaire ; les cellules sont très fragiles dans cet état motte -up .

pour chauffer l'inactivation ou de ne pas chauffer l'inactivation

Lorsque les techniques de culture de cellules étaient à leurs balbutiements , sérum bovin fœtal (FBS ) a été connu pour contenir des protéines du complément , qui sont des protéines du système immunitaire qui lysent les cellules . Les protéines du complément sont pas souhaitables dans la culture cellulaire . FBS de chaleur inactivation à 56 degrés Celsius pendant 30 minutes rendront protéines du complément inactifs . Préchauffage FBS à 37 ° C aussi est suffisant pour inactiver les protéines du complément .

Dans les premiers jours , la chaleur inactiver FBS a également tué mycoplasmes et d'autres contaminants . A l'époque , la stérilisation de filtration a été effectuée avec des filtres de 0,45 um . Aujourd'hui , nous filtrons stériliser FBS et médias par 0.1um ou filtres même 0.04um . Pas de mycoplasmes va glisser à travers cette

Cela nous laisse la question de savoir si ou de ne pas chauffer inactivate inactivation

chaleur dégrade tous les composants de la FBS - . . Tels que les vitamines , les acides aminés et les facteurs de croissance - . éventuellement en dessous du seuil pour certaines lignées cellulaires capricieux

Si vous travaillez avec une lignée de cellules à croissance lente ou capricieux , pensez simplement filtrer stérilisation vos FBS . Vous trouverez peut-être ce qui augmente la robustesse de vos cellules .