Préparation chloramphénicol Plate

Le chloramphénicol est un antibiotique à large spectre qui tue les microbes bactériennes en interférant avec leur capacité à se répliquer . Cet antibiotique a été développé initialement pour combattre les infections chez les humains , mais , selon Drug.com , il n'est utilisé que maintenant , à partir de cette publication , en dernier recours lorsque les autres médicaments ne fonctionnent pas en raison d'effets secondaires graves, tels que l'anémie aplasique , anémie hypoplasique , une thrombocytopénie et une granulopénie . Le chloramphénicol est utile dans un laboratoire de recherche pour des expériences de biologie moléculaire . Lorsque le chloramphénicol est préparé sur une plaque, il peut être utilisé pour détecter la concentration bactérienne ou d'isoler des souches spécifiques de bactéries pour d'autres expériences. Choses que vous devez
eau distillée
1,0 pour cent de la tryptone de chloramphénicol
0,5 pour cent d'extrait de levure
chlorure de sodium à 1,0 pour cent (NaCl ) de pH 7,0
95 pour cent d'éthanol Photos Agar
ballon de 2 litres
plaque d'agitation magnétique Photos de taille moyenne magnétique agitateur
latex ou en nitrile
échelle de laboratoire
autoclave
30 stériles plaques de 10 cm Photos stylo marquage bleu
la feuille d'aluminium de Parafilm
bande autoclave
Voir Instructions
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Mettez une paire de gants en latex ou en nitrile pour préparer le bouillon LB . Bouillon LB est une abréviation commune pour le bouillon Lysogénie , ou du bouillon de Luria , et il est aussi utilisé comme un milieu de croissance pour la culture de bactéries . Il peut être fait à partir de zéro dans le laboratoire , ou pour gagner du temps , il peut être acheté à partir de n'importe quel magasin biologie moléculaire fournisseur .
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Placez une feuille de papier peser sur la balance . Appuyez sur le bouton de réduction à zéro sur l'échelle de sorte que le poids du papier n'est pas inclus dans le poids final . Ajouter de petites quantités de tryptone à la fois, jusqu'à ce que vous atteignez le 10 g . Ensuite, pliez le papier peser dans la moitié avec la tryptone dans le centre . Choisissez le papier peser et utiliser le papier plié comme un entonnoir pour ajouter le tryptone au flacon de 2 litres avec soin. Suivez cette procédure pour peser 5 g d'extrait de levure , 10 g de NaCl et 15 g d'agar .
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Supprimez la barre d'agitation dans le ballon et centrer le ballon sur la plaque d'agitation magnétique . Ajouter suffisamment d'eau distillée pour amener la solution à 1 litre .
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Tourner la plaque d'agitation sur , et regardez la barre d'agitation . La plaque doit être réglé à la bonne vitesse pour permettre à la barre d'agitation de se déplacer à un rythme modéré , sans rester coincé sur les côtés du ballon . Ajustez les paramètres si nécessaire . Laisser reposer la solution sur la plaque jusqu'à ce que tous les réactifs ont dissous .
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Désactiver la plaque d'agitation , et étirer un carré de 3 pouces de parafilm sur le dessus du ballon , à couvrir et protéger le ballon de contaminants ou de se renverser . Puis couvrir le parafilm avec un morceau de papier d'aluminium et ajouter un morceau de ruban de marquage de l'autoclave au-dessus de la feuille .
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Placer la solution dans un autoclave sur le cycle liquide pendant 20 minutes à 15 psi à stériliser.
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Retirer le ballon de l'autoclave . Il sera très chaud . Laisser refroidir la solution à environ 55 - degrés Celsius , en laissant reposer à la température ambiante , ou en plaçant le ballon dans un bain de 65 degrés Celsius eau .
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Vaporisez et essuyez le travail la surface avec 95 pour cent d'éthanol pour éviter la contamination . C'est aussi une bonne idée de changer vos gants avant de manipuler les plaques .
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Mark le côté et le couvercle de chaque plaque avec bande bleue verticale à l'aide du marqueur . Cela indique les plaques contiennent bouillon LB et le chloramphénicol .
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Ajouter suffisamment d' antibiotique chloramphénicol à la solution de sorte que la concentration atteint la quantité désirée , selon les bactéries, vous allez travailler avec . Une concentration finale commune est 100ug/ml . Pour cette concentration , ajouter 1 ml de chloramphénicol en stock ( à 25mg/ml ) . Agiter le flacon dans un mouvement circulaire , ou le replacer sur la plaque aimant d'agitation pendant 1 à 2 minutes pour s'assurer qu'il est bien mélangé .
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Essuyez l'embouchure de la fiole avec de l'éthanol , puis verser la solution dans les assiettes, jusqu'à ce qu'ils soient remplis à moitié de la solution . Laissez les plaques durcissent , couvrent chaque plaque avec un couvercle , et les stocker à l'envers à Celsius 4 degrés pour les empêcher de se dessécher.