Comment pour colorer les gels d'agarose

Visualisation de l'acide nucléique ou la protéine est essentielle pour effectuer une électrophorèse sur gel d'agarose. Si vous travaillez sans coloration du gel , vous ne serez pas en mesure de voir où l'échantillon que vous testez a atteint , et donc des mesures de la taille moléculaire , par exemple , sera sévèrement limité . Tacher votre gel en utilisant un colorant bien testé commun tel que le bromure d'éthidium (BET ) qui fluorescente sous rayonnement ultraviolet ( UV) lorsque intercalés dans les molécules d'ADN ou d'ARN . Le colorant vous aider à effectuer votre expérience en montrant les molécules dans l'échantillon que les marques de couleur bleu foncé . Choses que vous devez
gants de sécurité et des lunettes
gel d'agarose
bromure d'éthidium
pipette ( Gilson pour de petites quantités )
tampon de chargement
Montrer Instructions

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Porter des gants de sécurité qui sont minces , mais de protection et permettre à vos doigts et les mains mouvement sans restriction . Utilisez une petite pipette de tirer quelques BET ( ou tache équivalent ) de son conteneur.
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Ajouter 0,5 microgrammes par millilitre de votre tache choisi votre échantillon . Couvrir l'échantillon et mélanger manuellement. Plusieurs secousses devraient être suffisantes .
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Ajouter un tampon de chargement chargé négativement au mélange à l'aide d'une pipette . Cela permet à l' échantillon coloré pour être vu à l'œil nu , en lumière naturelle et élimine le besoin de cher , UV nocifs qui seraient autrement dégrader les molécules dans lesquelles vous êtes intéressé . Xylène cyanol est un tampon de charge couramment utilisé , mais d'autres sont disponibles. Assurez-vous de choisir un tampon de chargement qui se déroulera à la même vitesse que la molécule que vous mesurez. Xylène cyanol tourne à la même vitesse que les fragments d'ADN qui sont 5000 paires de bases (pb) de longueur.
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Utilisez une pipette propre pour appliquer votre échantillon renforcée dans les puits au début de votre gel d'agarose . Le volume d'appliquer dépend de la taille des peignes de gel ( bien épaisseur et la longueur et l'épaisseur de gel ) . Colorer votre échantillon et non le contrôle de sorte que vous pouvez déterminer les paramètres qui vous intéressent ( tels que le poids moléculaire ) correctement et efficacement .
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Sinon , effectuer Southern Blot comme un moyen de visualiser votre échantillon . Transférer l'ADN sur une membrane de nitrocellulose. Exposer à une sonde d'hybridation . Ce n'est pas la coloration, en tant que tel , mais offre une alternative appropriée , telle que décrite par l'accès excellence .