T -Cell Protocoles Culture

T- cellules , qui appartiennent à une famille de cellules immunitaires appelées lymphocytes , sont générés lors d'une réponse immunitaire adaptative . Les cellules T proviennent de cellules souches de la moelle osseuse et maturité dans le thymus. Il existe plusieurs types différents de cellules T, chacun ayant une fonction différente. Les cellules T se distinguent l'une de l' autre par le récepteur de l'antigène des cellules T ci-jointe. Un sous-ensemble de cellules T portant le marqueur CD4 et aide à induire une réponse immunitaire . Sources de cellules T

cellules T peuvent être obtenues auprès de diverses sources , y compris la rate , les ganglions lymphatiques et le thymus , mais le sang périphérique est la source la plus facilement disponible de cellules T à des fins de culture . Des échantillons de sang sont soigneusement sélectionnés pour les infections et d'autres contaminants et manipulés avec soin sous une armoire de sécurité . T- cellules sont cultivées pour plusieurs raisons , y compris les mesures de toxicité et à étudier les réponses vaccinales immunologiques .
Isolation

cellules T sont généralement séparés des échantillons de sang total par la densité gradient de séparation , comme les cellules T sont moins denses que les globules rouges comme les erythrocytes et donc extraits par centrifugation. Une solution de sel neutre approprié est ajouté à l'échantillon de sang , suivie d'une solution de Ficoll isopaque . Ficoll isopaque a une densité plus grande que les cellules T , mais inférieur à érythrocytes et pendant la centrifugation se forme une couche intermédiaire entre les deux cellules , ce qui permet à des cellules T être enlevés par le haut. Les cellules T sont en outre centrifugée , le surnageant est éliminé , et une petite aliquote est compté pour déterminer la viabilité cellulaire. Les cellules sont utilisées directement pour des expériences ou cryoconservés pour une utilisation future . Réactifs

Cryoconservation

cryoconservation sont préparés à l'avance pour éviter la dégradation des cellules T à la salle température . Si ce n'est pas possible , les cellules sont conservés dans la glace ou réfrigérés . Les réactifs sont constitués de milieux de culture cellulaire et de 10 à 13 pour cent d'albumine de sérum humain (HSA ), des protéines, ainsi que les milieux de culture cellulaire et de 10 pour cent de diméthylsulfoxyde (DMSO). DMSO réduit la déshydratation, des changements de pH et les changements de concentration d'électrolyte associée à la congélation . Les cellules T sont remises en suspension dans le milieu de culture cellulaire contenant le réactif et HSA dans un cryotube . Le DMSO contenant le réactif est lentement ajouté aux cellules et doucement tourbillonné . Les cellules sont ensuite transférées dans un récipient contenant de l'isopropanol gel pour assurer une diminution progressive de la température et stockés .
Dégel

Quand les cellules T sont décongelés , un cryotube est retiré de stockage et on incube à 37 degrés Celsius. Par la suite , le milieu de décongélation approprié est ajouté lentement jusqu'à ce que les cellules à deux fois le volume est atteinte, transféré dans un tube séparé, et on le centrifuge . Benzonase est parfois ajouté au milieu de décongélation pour empêcher l'agglutination des cellules T mortes. Le culot centrifugé est répondu dans les milieux de culture de cellules et la viabilité cellulaire est évaluée . Les cellules T sont alors prêts à utiliser pour les expériences respectives .