Protocole cellule de congélation

Préserver les cellules par congélation est essentielle pour la recherche , la médecine vétérinaire et l'élevage , car il permet aux cellules d' être stockés pendant de longues périodes de temps . Le procédé de congélation choisi , cependant, doit réduire ou éviter d'endommager la cellule . L'agent de cryoconservation et le procédé peuvent dépendre du type de cellule . Préparation

cellules doivent être congelés quand ils sont en bonne santé et en pleine croissance avec une rentabilité de 90 pour cent . Il faut veiller sur la manipulation et centrifugation à grande vitesse et pipetage vigoureux ou aspiration doit être évitée pour maintenir la viabilité et prévenir les dommages cellulaires .
Cryoprotection

Un agent de la cryoconservation est utilisé en remplacement de l'eau intracellulaire. L'agent empêche les cristaux de glace et la déshydratation qui se produisent dans les cellules. Glycérol stérilisé et le diméthylsulfoxyde stérilisés sont souvent utilisés à une concentration de 5 à 15 pour cent (en volume par volume ) dilué dans du sérum de veau foetal ou des milieux de croissance , selon le type de cellule .

Congélation et de stockage

cellules dans le mélange de gel doivent être refroidis lentement. Si un congélateur programmable n'est pas disponible , cryotubes peuvent être enveloppés dans un tissu ou placés en mousse de polystyrène , ce qui peut ralentir le processus de congélation . Les cellules doivent être conservés à moins 80 degrés Celsius pendant 24 heures et ensuite transférés à l'azote liquide pour le stockage à long terme .

Décongélation

cellules congelés doivent être décongelés rapidement. Un bain d'eau à 37 degrés Celsius peut être utilisé . Il faut prendre soin de cellules stockées dans de l'azote liquide , cependant, que l'azote liquide peut pénétrer dans les flacons et peut exploser à la décongélation . Le mélange de congélation doit être dilué dans un milieu de croissance . La viabilité des cellules doit être évaluée avec le bleu trypan de colorant et les cellules cultivées comme d'habitude.