Plaque Assay Method

Un dosage est une technique utilisée pour isoler et purifier des virus et pour déterminer les titres viraux (la concentration la plus faible du virus qui aboutit à l'infection) . Un dosage de la plaque , à l'origine appelé un test virologique , a été développé pour mesurer et évaluer l'infectiosité des bactériophages . Selon Biologie - Online.org , il a ensuite été également appliqué à compter virus de mammifères . Les faits

Une plaque est un confluent , culture monocouche de cellules . Il se forme à la suite de l'infection de l'une des cellules par une seule particule de virus , selon la Biologie - Online.org . Une fois que la cellule est infectée , le virus se réplique et finit par tuer la cellule . En outre , les particules virales nouvellement répliquées propagent , infectent et tuent les cellules voisines .
Fonction

Dans un essai de plaque , la culture est d'abord teint avec un colorant particulier . Cette filière taches que cellules viables ( vivantes), selon Biologie - Online.org . En conséquence, les cellules mortes non colorées apparaissent dans la culture , sur le fond coloré. Actuellement , le test de la plaque est appliquée pour détecter les cellules qui produisent des anticorps qui détruisent les globules rouges par l'hémolyse .

Caractéristiques

érythrocytes sont des cellules (également appelés globules rouges ) qui contiennent un taux d'hémoglobine et le transport de l'oxygène et du dioxyde de carbone dans le sang , à partir de poumons et les tissus. Hémolyse se produit lorsque les érythrocytes se brisent et libèrent l'hémoglobine , selon Biologie - Online.org . En conséquence , dans le test de la plaque , la base est la plaque clair et indique que les globules rouges ont été hémolysés par les anticorps .
Méthode Partie I

Ten dilutions d'un stock de virus sont préparés avant d'effectuer un test de la plaque et aliquiots 0,1 ml sont mis sur les monocouches de cellules . Ce mélange est incubé pendant une période de temps de sorte que le virus a le temps pour attaquer les cellules. En outre , les monocouches sont couverts par un milieu nutritif qui contient une substance (généralement agar ) , selon "Détecter les virus : Une plaque dosage " par Vincent Racaniello . Le milieu nutritif forme un gel et après la culture est incubée , les cellules infectées originaux libérer descendance virale . Le gel limiter la propagation du virus dans les cellules environnantes , et en conséquence , la particule infectieuse produit une zone circulaire appelée plaque. Avec le temps , la plaque devient une taille visible à l'oeil nu et les colorants sont utilisés pour améliorer la visualisation .
Méthode Partie II

Le titre viral est calculé en la plaque dentaire unités, appelées PFU , par millilitre . Ils sont comptés et , à l'erreur minimisée , seules plaques qui contiennent entre 10 et 100 plaques sont comptées. En outre, selon "Détecter les virus : Une plaque Assay », pour 100 plaques compté le même titre varie de plus ou moins 10 pour cent . Par conséquent, l' estimation de l'erreur d'un essai de plaque est d'environ 10 pour cent , lorsqu'il est effectué correctement.