Protocole PBMC
Un composé commerciale pour promouvoir la séparation est placé dans chaque tube de centrifugeuse de 50 ml et les tubes sont centrifugés pendant trente secondes . Bouchons de tubes de sang sont pulvérisés avec de l'alcool avant l'ouverture, puis le sang total traité par un anticoagulant est ensuite transféré par l'intermédiaire d' une pipette dans des tubes à centrifuger . La couche de plasma du sang est aspiré avec une pipette .
Congélation
Les cellules de l'étape précédente seront ensuite centrifugés avec une solution saline tamponnée trois fois. Après un nombre de cellules , les échantillons seront centrifugés puis mis en suspension dans un milieu de congélation . Spécimens dans un milieu de congélation sont ensuite répartis entre les tubes cryogéniques dans un des montants mL . Flacons sont conservés pendant une nuit dans un
-70 º C congélateur et déplacés vers le stockage à long terme dans l'azote liquide le lendemain .
Safe dégel
Cryovials sont transférés à partir de l'azote liquide à un bain d'eau à 37 ° de l'échantillon et on laisse décongeler une à deux minutes . Un milieu de transport chaud est ajouté à chaque flacon . Suspension cellulaire diluée est centrifugé pendant sept minutes. Le nombre et la viabilité des cellules sont vérifiées , si les cellules ont besoin de concentration, les échantillons sont centrifugés sept minutes de plus. L'échantillon est dilué à la solution de travail et au repos pendant douze à dix huit heures avant de commencer l'examen dans le protocole spécifié.
