Le Protocole TMRE

tétraméthylrhodamine éthyle ( TMRE ) est un " lent , lipophile , cationique fluorescent reditribution colorant " utilisé dans le kit de l'évaluation du potentiel MitoPT ™ TMRE /TMRM mitochondrial membrane , fabriqué par immunochimie Technologies, LLC . Le processus permet de visualiser un transmembranaire gradient de potentiel électrique dans les cellules . Préparation de l' Essai

Le protocole est simple à suivre , et prend environ 20 minutes pour traiter à 37 degrés Celsius . Les cellules vivantes utilisées dans l'essai peuvent prendre entre quelques heures et quelques jours pour la préparation à l'emploi. Les cellules de contrôle peuvent prendre plusieurs heures pour préparer , comme ils ont besoin pour être amené à subir l'apoptose .
Protocole Partie 1

cellules culturels à une densité optimale pour l'apoptose ou le stress oxydatif induction , selon votre protocole d'induction spécifique , mais ne doit pas dépasser 10 ( 6 ) cellules /mL .

Protocole Partie 2

Dans le même temps, la culture d'une population non induite contrôle négatif cellule ( à la même densité que la population induite .
Protocole Partie 3

induire l'apoptose ou volontairement dépolariser les mitochondries suivante le protocole souhaité .
Protocole Partie 4

Préparer 1X test /tampon de lavage .
Protocole parties 5 à 8

préparer le 1 mM ou 0,2 mM MitoPT ™ TMRE /TMRM magasin . Pour Protocole Partie 6 , préparer une dilution à 1:100 du 1 mM , ou une dilution 1:20 de la mM MitoPT ™ TMRE /TMRM 0,2 solution pour dopage dans des échantillons de culture de cellules .

Protocole partie 7 , les cellules de tache en utilisant une concentration finale de 20-200 nM de solution MitoPT ™ TMRE /TMRM .

Protocole Partie 8 , analyser la données .