Les protocoles de purification de TPA
activateur tissulaire du plasminogène ou TPA est un type de serine protease , qui est une protéine capable de détruire les caillots sanguins. TPA se trouve dans les cellules qui couvrent l'intérieur des vaisseaux sanguins . Protocoles TPA font partie de la recherche pharmaceutique et médicale sur coups , ainsi que les maladies cardiaques et pulmonaires , telles que l'embolie pulmonaire et l'infarctus du myocarde . Purification du TPA se réfère à l'isolement de cette protéine à partir d'autres molécules par une série de procédés , y compris la Chromatographie et l'électrophorèse . Purification de TPA de rein de porc
Ce protocole est utilisé dans les études de la fibrinolyse , le processus de rupture du produit de coagulation appelée fibrine , liée à la formation de tumeurs . Les techniciens extraient TPA à partir d'acétone - séché rein de porc avec un tampon acétate de potassium , à un pH de 4,2 . Ensuite , ils ajoutent de sulfate d'ammonium pour induire la précipitation de la cellule. Ils ajoutent n- butyl- sépharose pour les échantillons, qui sont ensuite analysés sur un chromatographe . Concanavaline A est également ajoutée et chromatograph.y pour séparer différentes protéines est effectuée .
Purification du TPA de ovaire de hamster chinois et les cellules de E. coli
pureté des protéines est un facteur important dans le succès d'expériences biologiques . Purifiée TPA est également disponible dans le commerce , économisant ainsi du temps et d'éviter le risque de compromettre l'expérience en raison de solution purifiée mal . Ce protocole implique les procédés de purification de TPA dans des cellules bactériennes et de mammifère . Les techniciens précipitent des échantillons cellulaires , et d'effectuer leur filtrat affinité et analyse de la Chromatographie sur gel . Plus tard, ils analysent et comparent les résultats , avant la production commerciale .
Expression d'Active TPA humain dans E. coli
lysats cellulaires clarifiées sont ajoutés à une lysine - colonne de Sepharose , analysés dans un chromatographe et on le lave avec une solution de chlore de sodium. Un autre échantillon est chargé sur une deuxième colonne de chromatographie contenant des protéines qui se lie à TPA avec une très haute affinité . Un échantillon provenant de la deuxième colonne est mélangée avec une solution de zinc -sépharose . La protéine résultante montre que plus de 90 pour cent de pureté , selon la revue " Applied and Environmental Microbiology . "
