Génotypage Outils

Les chercheurs en génétique ont efforts combinés pour déterminer la séquence génétique entière , 9 milliards de bases , a trouvé dans le génome humain . Le génome est la teneur de l'ADN présente dans chaque cellule humaine consistant en répétant les bases azotées marquées comme " A ", " G ", " C " et " T. " La recherche en génétique continue de chercher des variations dans différents génomes humains ainsi que différentes espèces pour les études évolutives . Études de génétique médicale sont intéressés à trouver des anomalies génétiques ou variation génétique qui pourrait causer la maladie. Le génotypage est un procédé de détermination de la variation génétique sans le séquençage d'un génome entier . Les chercheurs isolent petites régions d'un génome à rechercher des différences de taille , le résultat d' un nombre différent de bases azotées . L'indice de base différente peut être provoqué par une anomalie génétique qui aboutit à des maladies telles que le diabète, la maladie d'Alzheimer et le cancer. Les outils utilisés pour effectuer des applications de génotypage ont évolué et développé pour détecter rapidement et précisément un individu avec le génotype . La réaction en chaîne de la polymérase

L'évolution de la technologie génétique origine du développement de la réaction en chaîne de la polymérase , ou PCR . Cette méthode permet aux chercheurs d'amplifier ou faire des copies de petites régions d'un génome en quelques heures. La région d'intérêt est déterminé par l'addition de molécules d'ADN courts --- amorces qui correspondent au début et à la fin de la zone d'intérêt .

PCR est devenu un outil précieux dans la recherche génétique . L'amplification de la même région à partir de différents individus fournit un procédé de comparaison . Identification Forensics utilise actuellement 15 régions distinctes pour la comparaison. Une région peut correspondre à différentes personnes . Toutefois , deux personnes doivent correspondre tous les 15 régions .
Gel d'agarose électrophorèse

PCR est la méthode pour amplifier des régions déterminées de l'ADN . Cependant, il ne fournit pas une méthode pour comparer la taille réelle des fragments . Les produits de PCR sont séparés par taille à l'aide d'un matériau semblable à un gel appelé " agarose. " Des fragments plus petits migrent plus rapidement à travers l'agarose en réponse à un courant électrique dans un processus appelé « électrophorèse sur gel d' agarose . "

Suite à la PCR , les fragments chargés sur l'agarose et migrent le long du gel quand un courant électrique est appliqué . Le bromure d'éthidium permet fragments à voir quand la lumière ultraviolette . Une électrophorèse sur gel d'agarose fournit un procédé pour la détermination rapide de PCR réussie se rapproche ainsi que la taille des fragments . Cependant, l'inconvénient d' agarose comme un outil pour le génotypage est que les fragments doivent être sensiblement différentes en taille pour des résultats précis . Agarose ne fournit pas un bon moyen pour comparer différents fragments d'une seule base .

Automatisés Séquenceurs et analyseurs génétiques
fluorescent fragments d'ADN marqués enregistrées par un séquenceur automatisé .

séquenceurs automatiques et des analyseurs génétiques sont devenus le principal outil utilisé dans le génotypage . Ceux-ci permettent fragments , différents par une base azotée unique , à déterminer rapidement et à peu de frais . Comme pour l'électrophorèse sur gel d'agarose , les fragments d'ADN sont tout d'abord amplifiées par PCR . Cependant, une amorce est marquée avec un colorant fluorescent ajouter de la couleur au fragment . Les échantillons sont séparés selon leur taille par migration à travers un polymère semblable à un gel en réponse à un courant électrique. Des fragments plus petits se déplacent plus rapidement que des fragments plus grands . Comme les fragments migrent vers l'extrémité du polymère , d'un appareil photo numérique enregistre la couleur, et envoie les informations à un ordinateur pour analyse. Équipement de séquençage automatisé est actuellement utilisé en identification médico-légale et les tests de paternité .
Next Generation Séquenceurs Déterminez également génotypes

instruments de séquençage de nouvelle génération ont rapidement émergé pendant la depuis 2006 . Cette technologie combine l'amplification par PCR et le séquençage en même temps , afin de déterminer des millions de bases à la fois. Le processus commence par PCR; Cependant , différentes amorces sont tenus de perles mélangées en une seule réaction permettant à des milliers de régions à amplifier à la fois. séquenceurs

de la prochaine génération se séparent ensuite les fragments de la taille et permettent une multitude de régions d'ADN à analyser . Le procédé est désavantageux comme un outil de génotypage lorsque les chercheurs sont intéressés à la comparaison d'une seule région du génome . L'avantage est que le génome isolé à partir d' une seule cellule fournit suffisamment de matière pour l'amplification par PCR. La comparaison des génotypes de cellules normales et anormales isolés à partir d'un seul individu peut aider à identifier les cellules cancéreuses et les traitements potentiels .