NBT test Protocoles
NBT ou nitro bleu de tétrazolium est un composé chimique utilisé dans la biochimie et immunologie pour détecter l'enzyme phosphatase alcaline . La substance est également utilisé dans le test de diagnostic de la maladie granulomateuse chronique , qui affecte les cellules de défense immunitaire . Protocoles de dosage immuno-empreinte comprennent NBT , le BCIP /NBT solution de substrat de la phosphatase alcaline et détection des galactosidase et activités de phosphatase alcaline dans le tissu . Immuno-
Immunoblotting est une technique utilisée pour détecter les anticorps , qui sont des protéines impliquées dans le processus de défense immunitaire , explique Susan R. Haynes dans « Protocoles d'Interaction ARN -protéine . " Cela comprend l'utilisation de NBT , ainsi que de l'albumine de sérum bovin , des anticorps primaires 9E10 , solution de coloration Coomassie , des membranes de nitrocellulose , une solution tampon de Tris base , d'ammonium par - sulfate , le sodium dodécyl sulfate et le butanol saturé en eau .
Photos BCIP /NBT phosphatase alcaline solution Substrat
techniciens préparent une solution avec trois gouttes de 1 pour cent de phosphate 5 - Bromo -4- chloro-3- indolyle ( BCIP ) , trois gouttes de 1,5 pour cent NBT , deux gouttes de la substance chimique lévamisole et la phosphatase alcaline (AP) tampon à pH 9,5 , selon le site IHC mondiale . La solution est ensuite incubée à la température ambiante et disponible à utiliser.
Détection de galactosidase et la phosphatase alcaline Activités dans les tissus
galactosidases sont des enzymes qui peuvent briser la molécule d' galactoside , présente dans les bactéries Escherichia coli et d'autres organismes. Conformément au protocole en ligne , au cours de ce protocole , les biologistes utilisent des échantillons de cellules de rat traités avec une solution de PBS , le glutaraldéhyde et paraformaldyde . Ensuite , on prépare le tampon de réaction bromo -chloro- indolyl- galactopyranoside ou de X -gal pour les échantillons , en utilisant le ferrocyanure de potassium , chlorure de magnésium, le désoxycholate de sodium et le détergent Nonidet P-40 . Les techniciens peuvent utiliser nitro bleu de tétrazolium ( NBT ) à la place de ferrocyanure de potassium comme une alternative plus rapide . Des échantillons de cellules sont ensuite observées au microscope .
