Propagation de plasmides recombinants

Trouvé dans certains espèces de bactéries et de levures , plasmides sont relativement petits , les anneaux de l'auto-réplication d'ADN situées à l'extérieur du chromosome principal d'une cellule. Ils sont très utiles dans le génie génétique , car il est relativement facile de raccorder des gènes sélectionnés d'autres espèces dans des plasmides , les transférer entre les cellules de l'hôte des espèces identiques ou différentes , et les inciter à reproduire - ou se propagent - à beaucoup plus élevé que à la normale - ou amplifiés - taux . Les plasmides recombinants sont simplement ceux qui ont été modifiées pour contenir des gènes provenant d'autres espèces . Surtout avec propagation amplifié , les plasmides recombinants peuvent plus rapidement et plus facilement expriment des protéines souhaitée sur une grande échelle , de l'industrie . Choses que vous devez
plasmides et de gènes bibliothèques préexistantes , ou plasmides et de gènes que vous avez vous-même isolés de leurs organismes d'accueil et d'épissage ensemble
équipement de culture cellulaire Photos des agent (s ) d'amplification tel que le chlorure de calcium , de choc électrique , , chloramphénicol , un choc électrique froid et la chaleur , et /ou enzyme Taq polymérase
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Choisissez la ou les procédures amplification qui correspondent le mieux à votre plasmide recombinant spécifique et hôte organisme. Certaines procédures fonctionnent mieux avec certains plasmides et d'ordinateurs que d'autres . Si vous travaillez avec un roman , le plasmide recombinant encore expérimentale et /ou sont d'essayer une autre espèce d'accueil , vous pouvez avoir à déterminer la meilleure ou les processus d'amplification par essai et erreur .
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Essayez le processus appelé transformation si vos espèces plasmidiques et cellule hôte spécifiques pourraient y répondre. Refroidir les cellules et les plasmides à zéro degrés C dans un chlorure de calcium ( CaCl ) de solution . Augmenter rapidement la température à 37-43 ° C. Ce changement brusque de température provoque les membranes cellulaires pour prennent de plus grandes quantités de plasmide .
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Envoyer à haute tension des impulsions électriques à travers la solution des plasmides et des cellules si l'électroporation est la méthode d'amplification souhaité. Cette technique augmente la perméabilité de la membrane cellulaire des plasmides .
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Exposer la culture de la cellule hôte à de faibles niveaux de l' antibiotique chloramphénicol à générer jusqu'à une centaine de plasmides par cellule . Ce procédé supprime la replication des principaux chromosomes des cellules hôtes tout en induisant la replication incontrôlée du plasmide , comprenant le gène épissé dedans.
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Appliquer la réaction de polymérisation en chaîne ou PCR pour générer des copies de plasmide à très ordres élevés de grandeur . La PCR est basée sur la polymérisation de l'ADN, la réaction chimique à travers lequel les séquences génétiques forment dans la nature. PCR est le plus souvent catalysée par une enzyme thermostable appelé la Taq polymérase , extraite d'une variété de bactéries qui vit dans les sources chaudes .