Comment préparer des plaques d'agar

plaques biologie moléculaire et de la bactériologie utilisation de gélose à des micro-organismes de culture tels que les bactéries d'expérimentation . L' agar est l'agent qui se solidifie , ou de gels, d'un milieu nutritif liquide requis par le micro-organisme de survivre et de se développer. Une fois transféré sur une plaque de gélose , les bactéries se développent en colonies distinctes ( si elles sont cultivées à de faibles concentrations ) ou de frottis ( si elles sont cultivées à des concentrations élevées ) et peut être récolté pour l'analyse. Les biologistes préparer des plaques d'agar , que le processus nécessite l'accès à des réactifs de qualité laboratoire et des machines et une bonne compréhension de la biologie moléculaire et les techniques stériles . Choses que vous devez
Gants
manteau Lab Photos de masque de visage
bec Bunsen
des boîtes de Pétri stériles hotte à flux laminaire de
10g bactotryptone de 5g d'extrait de levure
15g agarose
NaOH 1N 1 ml de l'eau distillée stérile Photos bouteille en verre
bande autoclave
autoclave
suppléments , par exemple, antibiotiques tels que l'ampicilline
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Revêtir un équipement de protection adéquat , y compris des gants , une blouse de laboratoire et un masque , et décontaminer toutes les surfaces . Travailler à proximité d'un bec Bunsen ou , de préférence , dans une hotte à flux laminaire stérile . Cela empêche les contaminants atmosphériques de tomber dans la gélose .
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Retirez la pile de boîtes de Pétri de leur emballage , mais mettre de reconditionnement des boîtes de gélose . Étiquette de la surface externe du plat (et non le couvercle ) avec le type de l'agar et la date de préparation . Poser les plaques comme une seule couche avec les couvercles enlevés pour faire couler de l'agar facile .
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Mélanger le bactotryptone , extrait de levure et d'agarose ensemble, puis ajouter l'hydroxyde de sodium ( NaOH) . Ajouter de l'eau distillée stérile pour obtenir 1 litre de milieu nutritif . Transférer cette solution dans une bouteille en verre avec au moins le volume de 1.5L . Visser sur le couvercle de la bouteille et l'étiquette la date de préparation et le nom des médias . Placer une bande de ruban autoclave sur la bouteille et l'autoclave pendant 25 minutes. Laissez la bouteille cool de pas inférieure à 45 degrés Celsius ( ou il va durcir prématurément ), mais pas plus de 50 degrés Celsius . Vous pouvez stocker des bouteilles de refroidi et solidifié agar à 4 degrés Celsius et chaud jusqu'à liquéfié . Si nécessaire pour votre expérience ou de la souche de bactéries particulier , ajoutez le type et la quantité de supplément approprié tels que les antibiotiques . Si le support est trop chaude , les suppléments seront détruits , afin de vérifier soigneusement la température des médias avant de poursuivre .
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Verser un volume suffisant de gélose à demi- remplir la cuve tandis que l'agar-agar est encore chaud et liquéfié . S'assurer que la surface est entièrement recouverte . Ne pas verser une quantité excessive ou laisser la gélose atteindre le sommet de la parabole . Garder les assiettes dans une atmosphère stérile en permettant au bec Bunsen ou hotte à flux laminaire pour fonctionner en continu . Laisser les plaques à mettre , puis remplacent les couvercles .
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Sécher les plaques d'agar pendant environ 30 minutes à une heure dans un four réglé ne dépasse pas 37 degrés Celsius . Alternativement, vous pouvez les laisser dans la hotte à flux laminaire pendant trois minutes ou sur un banc de laboratoire décontaminé dans une zone à faible trafic qui n'est pas de courants d'air pendant un jour ou deux . Le séchage des plaques empêche toute solution bactérienne placé sur la surface de la gélose de la simple dilution sur et glisser, au lieu de former des colonies qui collent à l'agar-agar .
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stocker soigneusement les plaques à l'obscurité et à 4 degrés Celsius . Empilez les boîtes de gélose secs avec leurs fonds pour vous permettre de voir clairement les étiquettes et pour empêcher les micro-organismes et les débris de tomber sur la surface de la gélose et les contaminer . Mis les petits plats de retour dans leur emballage , couvrir de papier d' aluminium et collez la fermeture de l'emballage. Étiqueter les plaques remplies de leur contenu et la date de préparation . Vous pouvez stocker les plaques pour jusqu'à deux mois et devriez les jeter après.