Perfusion Technique

L' technique de perfusion assure une fixation rapide et uniforme pour toutes les cellules individuelles présentes dans le tissu . A 4 pour cent du paraformaldéhyde fixateur est transmise via le système vasculaire à l'obtention de tissus d'intérêt. Le site principal de la cible pour l'administration du médicament dans un organe particulier peut être identifié à l'aide de cette technique. Perfusion a également aidé les scientifiques à comprendre l'organisation structurelle et fonctionnelle du cerveau humain . Choses que vous devez
animal ( rat ou singe)
pompe à perfusion , bêcher
fixateur ( 4 pour cent paraformaldéhyde )
seringues aiguilles
perfusion goutte à goutte réglé Photos Ciseaux Scalpel
0,9 pour cent saline
la boîte de glace de forceps
Voir Instructions
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Préparer frais de 4 pour cent paraformaldéhyde en mélangeant 40 g de paraformaldéhyde dans 800 ml d'eau . Chauffer la solution à 60 ° C tout en agitant . Refroidir la solution à 4 ° C. Ajuster le pH à 9,5 à l'aide d' un pH-mètre . Pour ajuster le pH , ajouter de l'acide acétique glacial pour obtenir le pH souhaité
2

Mettre en place la pompe de perfusion ; . Fixer toutes les pièces de verre et une aiguille de perfusion . Run 100 ml d'eau du robinet à travers le tubage de la pompe à perfusion pour enlever tout résidu de pièces en verre. Placer un bécher de fixateur dans une glacière .
3

Ouvrez la fin du tube de perfusion et le placer dans un bécher fixateur . À l'échelle le volume de la solution en fonction de la taille de l'animal . Maintenant, ajustez la valve de la pompe à perfusion à une lente , goutte à goutte régulier. Fermer le robinet . Remplir l'appareil de perfusion à 0,9 pour cent (poids /volume ) de solution saline.
4

Mettre en place les instruments de chirurgie à proximité de la table d'opération. Faire une piqûre d'anesthésie de l'animal en fonction de son poids corporel ( kétamine 0,5 mg /kg ) . Placez l'animal sur la table d'opération avec son dos vers le bas.
5

Faire une coupe avec un scalpel , le long de la longueur de la membrane . Avec les grands ciseaux , côté émoussé vers le bas , couper les tissus conjonctifs dans le bas de la membrane. Exposer le coeur . Maintenez le cœur battant avec la pince et insérer une aiguille dans le ventricule gauche .
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Ouvrez le robinet de la pompe à perfusion pour permettre l'écoulement de solution saline à 0,9 pour cent . Assurez-vous que la solution est fluide et l'animal est vivant . Le cœur de l'animal doit être en fouettant. Une fois que le sang est remplacé par la solution saline , changer la solution à 4 pour cent paraformaldéhyde .
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Arrêter la perfusion et disséquer un tissu d'intérêt . Gardez le tissu dans le même milieu à 4 ° C.