Protocole pour la transfection de la GFP
L'utilisation de la protéine fluorescente verte a révolutionné la biologie moléculaire et cellulaire , il a permis aux chercheurs de visualiser les cellules et les protéines de façon jamais possible . Son impact sur la recherche scientifique était si profond que Osamu Shimomura en 2008 a remporté le prix Nobel de chimie pour la découverte et l'isolement de la GFP de méduse fluorescente . Définitions
Un gène est la séquence d'acide désoxyribonucléique dans les cellules qui est responsable de la production d'une protéine spécifique . Un plasmide est un fragment d'ADN séparée contenant un gène d'intérêt tel que la GFP . La transfection est la méthode pour introduire un plasmide dans les cellules.
Méthodes
transfection implique généralement le mélange d'un plasmide d'ADN contenant un gène tel que GFP avec des lipides ou des sels . Les cellules sont exposées à cette solution , ce qui crée des trous dans la membrane cellulaire , permettant ainsi le plasmide dans la cellule dans laquelle le gène peut être exprimé en tant que protéine . Kits de transfection commerciaux sont disponibles , ou les réactifs peuvent être réalisées dans un laboratoire. Le choix de la méthode de transfection dépend du type de cellules et les plasmides utilisés. La GFP est visualisée et surveillée avec un équipement qui détecte la fluorescence .
Utilise
GFP est généralement attaché à une protéine d'intérêt pour la transfection . Le Comité Nobel distingué le suivi des " lésions nerveuses des cellules au cours de la maladie d' Alzheimer » et « comment les cellules bêta productrices d'insuline sont créés dans le pancréas d'un embryon en développement " comme exemples .
