Pourquoi deviez-vous laver les puits après chaque étape ?

Laver les puits de la microplaque après chaque étape de divers tests de biologie biochimique et moléculaire tels que l'ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay), l'isolement de l'ADN/ARN, la PCR et le Western Blotting est une partie essentielle du protocole expérimental. Le but des étapes de lavage est d’éliminer les réactifs résiduels, les composants de réaction ou tout contaminant susceptible d’interférer avec les étapes ultérieures ou d’affecter l’exactitude et la spécificité du test.

Voici quelques raisons pour lesquelles des étapes de lavage sont nécessaires :

Élimination des substances non liées : Les étapes de lavage après l'ajout de réactifs ou d'anticorps aident à éliminer toutes les substances non liées, telles que les anticorps en excès, les molécules de liaison non spécifiques ou les composants de réaction qui ne sont pas capturés ou liés à la phase solide. Cela garantit que le signal de détection est spécifique et exempt d'interférences de fond.

Minimiser la contamination croisée : Les étapes de lavage réduisent efficacement le risque de contamination croisée entre les échantillons. Ceci est particulièrement important lorsque plusieurs échantillons sont traités simultanément, car cela empêche le transfert de composants de réaction ou de contaminants d’un puits à l’autre. Le lavage aide à maintenir l’intégrité et l’exactitude des résultats des échantillons individuels.

Élimination efficace des substances interférentes : Un lavage est nécessaire pour éliminer les substances qui pourraient interférer avec les étapes suivantes. Par exemple, dans un test ELISA, le lavage aide à éliminer les complexes conjugués-anticorps non liés, réduisant ainsi le développement de la couleur de fond et améliorant la spécificité de la réaction colorimétrique. En PCR, le lavage élimine les nucléotides, les amorces et les polymérases des cycles d'amplification précédents, minimisant ainsi le risque de contamination par transfert et garantissant une amplification précise lors du cycle suivant.

Standardisation et reproductibilité : En suivant des procédures de lavage standardisées, les chercheurs s'assurent que les conditions sont cohérentes d'une expérience à l'autre et entre les différents laboratoires. Cette cohérence est essentielle pour obtenir des résultats fiables et reproductibles.

La procédure de lavage peut impliquer l’utilisation d’une pipette multicanal ou d’un laveur de plaques automatisé pour distribuer et aspirer le tampon de lavage. Le tampon de lavage est généralement une solution saline tamponnée qui ressemble à la composition du tampon d'origine utilisé dans le test, mais ne contient aucun composant réactionnel.

Un lavage adéquat sans trop laver est crucial. Un lavage excessif peut entraîner la perte de composants essentiels liés à la phase solide et affecter la sensibilité du test. Par conséquent, les protocoles de lavage sont soigneusement conçus pour obtenir une élimination optimale des substances indésirables tout en préservant l’intégrité des molécules ou analytes d’intérêt immobilisés.