Comment faire pour tester la concentration de l'amylase Enzymes

enzymes amylase sont produites dans le pancréas et dans les glandes salivaires et aident à digérer les hydrates de carbone et de processus . Lorsque le pancréas devient malade , l'amylase est libéré dans la circulation sanguine . Quand un patient a des problèmes digestifs ou il ya la maladie du pancréas , un médecin vous prescrira un test sanguin pour déterminer le niveau d'amylase dans le sang . La surveillance des taux d'enzymes d'amylase produira beaucoup d'informations sur la progression de la maladie et les effets du traitement . Choses que vous devez
spectrophotomètre UV /VIS
15 grands tubes à essai
support de tube à essai
1 mg /ml solution d'amidon
De l'eau déminéralisée
KI /iode réactif
Cuves de l'échantillon de sang de> Pipettes
Dropper Photos Centrifugeuse de Chronomètre
Afficher Préparation de Instructions d'une norme amidon courbe
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Allumez le spectrophotomètre et réglez-le sur une longueur d'onde de 620 nm . Laisser l'appareil chauffer pendant un minimum de 10 minutes pour que la réponse sera stable pendant l'expérience.
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défini six tubes à essai , les étiqueter 1-6 et les placer dans un test tube de rack. Disposez les solutions d'amidon , de l'eau déminéralisée et la solution KI /iode sur la paillasse
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tube 1 Remplir avec 3 ml d' eau désionisée aide d'une pipette .; ce sera le blanc . Remplir les tubes 2-6 avec 3,0 ml , 2,9 ml , 2,7 ml , 2,4 ml et 2,1 ml d' eau désionisée , respectivement. Ajouter solution d'amidon à chacun des tubes 2-6 dans l'ordre suivant : le tube 2 reçoit 0 ml , tube 3 obtient 0,1 ml , tube 4 obtient 0,3 ml , tube 5 obtient 0,6 ml et tube 6 obtient 0,9 ml
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Ajouter une goutte de solution de KI /iode à chacun des six tubes . Mélanger soigneusement chaque tube à fond avant l'enregistrement de leur absorbance dans le spectrophotomètre .
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Remplissez la cuvette avec la solution de blanc , nettoyer l'extérieur de la cuve et la placer dans le trou blanc du spectrophotomètre . Régler l'absorbance zéro . Toutes les autres solutions donneront une absorbance positive.
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Remplir l'échantillon cuvette avec chacun des cinq autres solutions à leur tour . Essuyez l'extérieur de la cuvette avant chaque mesure . Notez la valeur d'absorption de chaque tube . Rincer la cuvette avec la nouvelle solution au moins une fois avant de remplir pour le test .
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Faites un graphique qui trace les lectures d'absorbance contre la concentration de l'amidon . C'est la courbe standard qui vous permet de déterminer la concentration d'une solution qui a une lecture de l'absorbance donnée.
Détermination amylase Concentration
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nettoyer tous les tubes à essai de la première partie de l'essai. Conserver le tube vide pour une utilisation ultérieure .
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Prélever un échantillon de sang du patient . Placer l'échantillon dans une centrifugeuse et on sépare les globules rouges du plasma sanguin.
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Remplir un tube à essai avec 9 ml d' eau désionisée et 1 ml de plasma sanguin. Il s'agit d'une dilution 1:10 du plasma . Mélanger à fond et le tube pipette 1 ml de la solution dans un second tube à essai. Nommez les deux tubes avec leur contenu .
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Préparez-vous à effectuer un test chronométré . Avoir un chronomètre à portée de main et mis en place sept tubes à essai avec des cuvettes dans le rack de tubes à essai . Vous prendrez lectures toutes les deux minutes une fois le test commence . Noter l'heure exacte et la lecture d'absorbance pour chacune des sept points de données . Remplir chacun des sept tubes à essai avec 2 ml d' eau désionisée .
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Ajouter 9 ml de la solution d'amidon pour le tube à essai qui a la 1 ml d' une dilution à 1:10 de plasma . Dès que vous commencer à ajouter la solution d'amidon , démarrer le chronomètre . Mélanger le tube à essai et bien pipette 1 ml de la solution d'amidon /de plasma dans la première des sept tubes à essai. Noter le temps . Ajouter 1 goutte de solution de KI /iode pour le tube à essai et mélanger.
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Transfert à la cuve , nettoyez l'extérieur et noter l'absorbance . Répétez le processus avec les six tubes à essai restants à deux minutes d'intervalle. A l'issue de l'épreuve chronométrée , vous devriez avoir des lectures pour le temps réel et l'absorbance pour les temps travées de 0 , 2 , 4 , 6 , 8 , 10 et 12 minutes.
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utiliser la norme courbe de trouver la concentration de l'amidon , pour chacun des sept points de données . Ces points seront en baisse avec le temps. L'amylase digère l'amidon et au fil du temps consomme tout l'amidon disponible .
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graphique les points de données pour le test chronométré que la concentration de l'amidon en fonction du temps . La pente de cette courbe indique la quantité d' amylase dans l'échantillon de plasma .