Terminal protocole de séquençage N

dégradation d'Edman - un procédé bien connu pour l'identification de l'acide aminé N-terminal d'une protéine - nécessite un clivage de l'acide aminé , suivie par l'identification par chromatographie ou électrophorèse . Les processus automatisés accélèrent le séquençage N- terminal. Les faits

protéines produites à l'intérieur des cellules individuelles agissent comme des hormones, des enzymes et d'autres régulateurs importants . Mutation génétique résultant en une protéine anormale pourrait avoir des conséquences graves pour la santé .
Processus

L'acide aminé N -terminal est clivé par traitement avec l'un de plusieurs réactifs , alors hydrolyse pour former un acide aminé distinct . Chromatographie sur couche mince , HPLC ou électrophorèse détermine la taille de l'acide aminé , et la compare à un standard de taille connue . La nouvelle extrémité N-terminale de la protéine restante peut être clivée de même pour l'identification .

Automatismes

Applied Biosystems a conduit au développement de l'automatisation de la dégradation d'Edman , qui lie une protéine purifiée à une membrane et le traite avec phénylisothiocyanate . De l'acide aminé libre injecté automatiquement dans un système HPLC pour l'identification .
Complications

protéines doit rester relativement pur et exempt de contaminants de déterminer avec précision l'acide aminé N -terminal . Limites de dégradation d'Edman nécessitent de grosses molécules protéiques fragmentés en petites chaînes ne sont plus peptidiques 50 acides aminés .