Procédures d'étiquetage des anticorps
procédures d'étiquetage des anticorps sont les techniques utilisées dans les sciences biologiques pour détecter la présence de molécules spécifiques . Ces procédures utilisent la relation entre un antigène et un anticorps . Les antigènes peuvent être n'importe quelle molécule qui reconnaît le système immunitaire . Un anticorps est une protéine en forme de Y qui reconnaît spécifiquement un antigène unique . Les biologistes utilisent la relation de liaison entre un anticorps et l'antigène pour déterminer la localisation d'une molécule spécifique dans un échantillon . ELISA
ELISA , ou un dosage immuno-enzymatique , est une technique de laboratoire biologique utilisé pour détecter la présence d'un antigène ou d'un anticorps . Il est souvent utilisé dans le diagnostic médical pour déterminer si un patient a été exposé à un type particulier d' infection .
Pour effectuer un test ELISA , le — de l'échantillon contenant l'antigène d'intérêt — est ancré à un support solide dans un plat . Une solution de l'anticorps complémentaire est ajouté à la boîte , et l'anticorps se lie à l'antigène. L'excès d'anticorps est ensuite lavé , ne laissant que les antigènes - anticorps lié paires dans le plat . Ceux-ci peuvent être visualisés par l'addition d'une molécule fluorescente qui se lie à l'anticorps et donne un signal visuel , qui peut ensuite être quantifié. De cette façon , la présence et la quantité de l'antigène d'intérêt peuvent être déterminées indirectement .
Western Blot
Un Western blot est un type de technique différente utilisée pour détecter une protéine spécifique dans un échantillon, et de déterminer sa taille . Tout d'abord, les protéines de l'échantillon sont étalés par taille sur un gel par électrophorèse sur gel . A ce stade , les protéines ne sont pas visibles à l'oeil nu . Les scientifiques transfèrent ensuite les protéines sur une membrane et d'ajouter une solution contenant l'anticorps à l'antigène d'intérêt . Après élimination par lavage de l'excès de solution , l' anticorps est lié à l'antigène sur la membrane .
Ajout d'un anticorps secondaire provoque l'original, ou primaire , l'anticorps à émettre de la lumière . Quantifier la quantité de lumière émise permet aux chercheurs de déterminer la présence de l'antigène , sa taille par rapport à d'autres protéines et sa concentration relative .
Immunohistochimie
immunohistochimie est une technique qui permet aux chercheurs de visualiser la localisation d'une protéine dans un échantillon de tissu . Petites tranches d'un échantillon sont préparés et un anticorps primaire , qui s'attache à l'antigène d'intérêt , est ajouté . La solution en excès est éliminé par lavage avant chercheurs ajoutent un anticorps secondaire . Cet anticorps se fixe à la paire antigène-anticorps primaire et émet de la lumière , de la signalisation de la localisation de l'antigène d'intérêt .
Scientifiques utilisent un microscope pour visualiser où l'antigène est dans la cellule. Plusieurs anticorps différents , chacun spécifique d' une protéine particulière , peuvent être utilisées pour déterminer la position relative de plusieurs molécules dans une cellule. Si c'est le but , différents anticorps secondaires de couleur sont utilisés pour distinguer entre les différentes molécules d'intérêt .
Cytométrie en flux
activé par fluorescence cellulaire — tri ou FACS — est un type de cytométrie de flux utilisé pour séparer les différents types de cellules dans une solution . Chaque type de cellule différent est " marqué " avec un anticorps spécifique de ce type de cellule . Chacun de ces anticorps émet une couleur différente de la lumière . Une machine agite la solution à la diviser en gouttelettes individuelles et utilise un capteur pour détecter la couleur de chaque gouttelette . La machine trie les cellules par couleur émise , en les divisant en fonction du type de protéines qu'elles contiennent. Méthodologie FACS permet aux chercheurs de trier et de quantifier les cellules d'intérêt à leurs questions de recherche .
Immuno- microscopie électronique
microscopie électronique normale permet aux scientifiques d'examiner la structure d'une cellule agrandie jusqu'à 1 million de fois . La microscopie immuno- électronique utilise les propriétés de liaison anticorps-antigène pour visualiser les protéines particulières dans des coupes de tissus très légers. Tout d'abord, les anticorps avec des particules d'or attachés sont autorisés à se lier à l'antigène d'intérêt . Microscope électronique visualise ensuite les particules d'or , ce qui donne une image des chercheurs de l'endroit où la protéine est localisée dans la cellule.
Bien que la microscopie immuno- électronique est simple en théorie , il est techniquement difficile et très coûteux à employer , limitant sa popularité d'utilisation dans de nombreux programmes de recherche biologique .
