Les cellules adhérentes Protocole
Les cellules en culture sont soit une forme en culture en suspension , telles que des cellules sanguines ou des cellules telles que les fibroblastes qui nécessitent une surface sur laquelle ils peuvent adhérer . Certains de ces surfaces peuvent nécessiter revêtement dans différentes matrices extracellulaires en fonction du type de cellules et d'études. Toutes les cultures cellulaires doivent être effectuées à des conditions aseptiques . Environnement Optimum
La majorité des types de cellules peuvent être cultivées dans du milieu d' Eagle modifié par Dulbecco ( DMEM) ou le Roswell Park Memorial Institute (RPMI ) avec l'ajout de 10 pour cent de sérum de veau foetal , 2 millimoles de l' glutamine en acide aminés et des antibiotiques , par exemple, 100 unités de pénicilline et 0,1 milligramme par millilitre de streptomycine . Les cellules sont maintenues dans leurs médias dans un incubateur humidifié à 37 degrés Celsius et 5 pour cent de dioxyde de carbone .
Fractionnement
cellules doivent être vérifiés tous les jours de l'infection , la mort ou la croissance . Une fois que le ballon de culture de tissu est enrobé dans des cellules de 80 pour cent , les cellules doivent être répartis de maintenir la santé des cellules et de la phase logarithmique de croissance . Médias sont éliminés et les cellules sont lavées dans du tampon phosphate salin . Les cellules adhérentes nécessitent l'addition de trypsine et de l'acide éthylènediaminetétraacétique ( EDTA) pour éliminer les protéines d'adhésion cellulaire . Agitation douce devrait éliminer les cellules . Les médias doivent être ajoutés pour neutraliser la solution de trypsine /EDTA .
Repiquage
Les cellules diluées et solution trypsine /EDTA peut être centrifugé pour sédimenter et lavage les cellules . Les cellules peuvent être remises en suspension dans les médias et dilués et réétalées dans de nouveaux flacons . Chaque fois que les cellules se divisent le nombre de cellules de passage est augmenté d'une unité.
Médias Changer
médias doivent être changés deux fois par semaine en supprimant les anciens médias et les remplacer par nouveau , réchauffé médias .
