Protocoles rétrovirus d'infection
contenant un génome à ARN qui est encapsulé dans une capside et enveloppe lipidique , les rétrovirus contiennent des chaînes de polypeptides qui les aident à lier à des récepteurs dans les membranes des cellules hôtes qu'ils infectent . Considérant que l'information héréditaire de la plupart des cellules est codée dans l'ADN , que des rétrovirus est contenue dans l'ARN; retrovirus portent également l'enzyme transcriptase inverse , ce qui leur permet d'adhérer à l' ADN de l'hôte . Certains protocoles sont suivies par des laboratoires de l'infection de la cellule ciblée de l'ADN par ces virus . Préparation du Laboratoire
Certains équipements et fournitures de laboratoire sont nécessaires pour faciliter le processus de l'infection rétrovirale . L'équipement comprend une aide de la pipette , 1 pipette - homme , une culture tissulaire capot , Celsius 37 degrés et 32 degrés Celsius incubateurs , et une centrifugeuse Eppendorf . Les fournitures comprennent des plaques de tissus de culture , une pipette Pasteur jetable , surnageant rétroviral qualifié , polybrene stérilisée par filtration et le sulfate de protamine , stérilisée par filtration .
Préparation de la cellule de l'infection
Avant à l'infection , les cellules cibles doivent être répartis dans une plaque de culture tissulaire et on les incube pendant une nuit dans un incubateur à 37 degrés Celsius , de degré cinq pour cent de CO2 . Le but de la période d'incubation est de créer des cellules qui sont 50 % de confluence . Préparation des cellules est préalablement nécessaire de veiller à ce que les cellules sont optimisés pour le processus d'infection . Le Nolan Lab à l'Université de Stanford recommande que l'infection de cellules commencent toujours par infecter début les cellules NIH 3T3 , afin d'optimiser les résultats de l'essai .
Infecter les cellules
Après la période d'incubation est terminée, les chercheurs devraient s'assurer que les cellules sont à la fois sain et du droit confluence . Utilisation de la hotte de culture tissulaire , la matière cellulaire est aspiré et un surnageant viral est appliqué aux cellules. Une fois appliquée , la plaque doit être bercé et en arrière pour s'assurer qu'il est uniformément répartie. Les cellules doivent alors être spin- inoculé en les plaçant dans la centrifugeuse Eppendorf et les tournant à 2500 tours par minute pendant 90 minutes à une température de 30 degrés Celsius . Par la suite , les cellules doivent être incubées à 32 ° C pendant un à deux jours . Le virus est ensuite remplacé par les cellules extraites et placé dans l'incubateur à analyser n'importe où de trois à sept jours après l'infection initiale .
