Ce qui est un gel d'électrophorèse
? L'électrophorèse sur gel est un procédé de séparation , l'identification et la caractérisation des mélanges de protéines ou d'acides nucléiques . Échantillons dénaturés migrent après l'application de l'électricité dans un gel mince , humide généralement fabriqués à partir de polyacrylamide ou agarose . Les échantillons séparés sont colorées afin qu'ils puissent être vus . L'électrophorèse sur gel est utilisé dans la recherche de protéines et d'acides nucléiques et dans les hôpitaux pour identifier des protéines inhabituels ou des motifs d'ADN pour diagnostiquer des maladies , des défauts génétiques et des relations génétiques . Préparation des échantillons
Quand un détergent tel que le dodécylsulfonate de sodium (SDS ) est ajouté à une protéine ou un acide nucléique , le détergent va associer à déplier et protéines dénaturées ) ( et de l'acide nucléique . La dénaturation des protéines , il est plus facile de déterminer leur masse moléculaire dans une électrophorèse . La quantité d'échantillon nécessaire est généralement de 100 à 500 nanogrammes par bande de l'échantillon pour les protéines et de 5 à 100 ng par bande pour les acides nucléiques dans un volume total d'environ 25 à 40 microlitres .
Gels Photos Photos
gel , typiquement en polyacrylamide ou agarose , peuvent être préparés ou achetés pour séparer ces protéines. Le gel est un peu comme de la gélatine. Il est principalement constitué d'eau , mais il est assez solide pour la manipulation. Les gels contiennent un tampon pour contrôler le pH . Le gel est très mince ( 1 à 2 mm ) et rectangulaire . Un côté ressemble à un peigne avec beaucoup de dents manquantes . Les écarts sont appelés puits .
Échantillon Chargement
On place le gel dans une chambre avec le tampon et les protéines dénaturées sont ajoutés aux puits . Des échantillons de poids moléculaires connus sont ajoutés dans les puits extérieurs. Les gels sont faites avec des quantités variables de polyacrylamide. Une faible résistance de gel ( 4 pour cent) est préférable pour la séparation de molécules de poids moléculaire élevé , tandis qu'une résistance de gel élevée ( 12 pour cent) est utilisé pour les molécules de poids moléculaire supérieur . Un gel de gradient varie en force de gel et peut séparer une large gamme de protéines avec la perte d'une partie de résolution .
Electromigration
Avec l'application d'une tension électrique élevée , les protéines dénaturées se déplacent vers le fond du puits . Plus le poids de la protéine, le plus lent se déplace. Lorsque l'électricité est coupée , les protéines s'arrêtent. On enlève le gel de la chambre et les roches dans un plat avec de la teinture . Colorants organiques tels que le bleu de Coomassie ou colorants métalliques sont utilisés à des protéines de taches tout en colorants fluorescents tels que le bromure d'éthidium sont utilisés pour les acides nucléiques .
Analyse des résultats
Avec l' suppression de l'excès de colorant , on peut voir que les mélanges se séparent en bandes qui ressemblent à des échelles. La position des bandes est comparée à la distance parcourue par les normes pour déterminer le poids moléculaire de l'échantillon dans chaque bande . Le gel peut être déshydraté avec de l'alcool et séché de sorte qu'il peut être sauvé. L' intensité de la couleur de la bande peut ensuite être mesurée pour déterminer la concentration de la protéine dans chaque bande .
Protocole développement
protocoles standard sont disponibles pour travailler avec le bien- des protéines connues . Si un chercheur travaille avec un échantillon inconnu, la force du gel , le type de tampon , tampon pH , tension , temps d'exécution , et une tache peut tous besoin d' être optimisé pour obtenir la meilleure séparation et le signal .
protocoles
