Comment faire une carte de restriction

Dans les premiers jours de la biologie moléculaire , les scientifiques couramment utilisés cartographie de restriction de comprendre les gènes qu'ils étudiaient . Dans les laboratoires de recherche modernes , une cartographie de restriction est largement dépassée parce que le séquençage est devenue plus largement disponibles et plus économique que par le passé . Cependant , il ya des cas dans lesquels une carte de restriction peut être suffisant pour un chercheur d'effectuer ses enquêtes . L' approche globale de la cartographie de restriction implique l'utilisation d' enzymes digestives pour briser physiquement un échantillon d'ADN . Une fois que vous mesurez les produits de cette digestion , vous pouvez " remonter " les morceaux et d'en déduire la séquence d'origine de l'ADN . Choses que vous devez
enzymes de restriction
échantillon d'ADN
solution tampon
glace et bain d'eau chaude
électrophorèse sur gel équipements
Voir Instructions de l'ADN Digestion
Photos 1

Ajouter une enzyme de restriction à votre échantillon d'ADN . Utilisez EcoR1 , une enzyme utilisée , par exemple .
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Ajouter ce mélange à une solution tampon , qui est essentiellement un lieu pour que la réaction se produire.
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Augmenter la température de la réaction , comme indiqué dans le manuel New England BioLabs . Chaque enzyme de restriction a une température de réaction spécifique à laquelle elle fonctionne le mieux . En outre, chaque enzyme a une séquence nucléotidique spécifique, il est conçu pour cibler . EcoRI va scanner et couper l'ADN à la CAATTC de la séquence nucléotidique . Cet ordre exact des nucléotides doit exister pour l'enzyme à se lier et couper l'ADN . Jusqu'à ce point , tous les matériaux doivent être conservés sur de la glace pour empêcher l'activité indésirable.
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Après avoir laissé la réaction se produise , comme indiqué dans le manuel , exécutez le mélange dans une machine d'électrophorèse sur gel pour séparer l'ADN fragments basés sur la taille . Les plus petits fragments se déplacent le plus loin dans le gel .
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Mesurer la distance parcourue par chaque fragment d'ADN . Ces cinq étapes doivent être répétées avec plusieurs enzymes différentes séparément .
Construire la carte de restriction
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l'aide des données obtenues à partir du gel , de collecter toutes les informations que vous avez trouvé à l'aide des enzymes de restriction différentes .
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déduire l'ordre des sites de restriction par comparaison des différentes longueurs des fragments produits par chaque enzyme . Par exemple, si l'enzyme # 1 a produit deux fragments de longueur égale et enzyme # 2 produit trois fragments de longueur égale , on peut conclure que l'enzyme # 1 coupes à mi-parcours de l'ADN et d'enzymes # 2 coupe l'ADN en trois tiers .

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utilisant les conclusions tirées à l'étape 2 , assembler l'ordre des sites de restriction pour l'ADN .