Protocoles génétiques

ADN génomique fournit le plan pour les cellules à s'organiser en organismes vivants . ADN contient quatre bases azotées répétitifs appelés adénine, la guanine , la cytosine et la thymine . Les chercheurs ont déterminé avec succès la séquence de bases entière , le génome , pour de nombreux organismes complexes , y compris les humains. Il ya plusieurs raisons importantes pour séquencer un génome . La génétique médicale est concerné par la découverte d'anomalies génétiques responsables de maladies telles que le diabète , la maladie d'Alzheimer et le cancer . Généticiens évolutionnistes comparer les génomes d'espèces apparentées à développer la taxonomie précise . Protocoles de base génétiques dans la recherche sont les mêmes quel que soit le but de la recherche . Isolement de l'ADN à partir de cellules

recherche génétique nécessite l'extraction d'un échantillon d'ADN pur de cellules . Un protocole de base commence par rupture et l'élimination des parois cellulaires végétales ou de protection des membranes de cellules animales avec une enzyme appelée lysozyme. Des composants cellulaires non génétiques sous la forme de précipités sont éliminés par rotation rapide avec une centrifugeuse tandis que l'ADN reste en solution . L'ADN est ensuite précipité en présence de sel d' acétate de sodium avec de l'éthanol . Précipités et culots de centrifugation finale matériel génétique pur à des fins de recherche .
Polymerase Chain Reaction

recherche génétique nécessite suffisamment de copies de régions d'ADN spécifiées . La réaction en chaîne par polymerase , ou PCR , est un procédé de production de copies d'ADN de façon exponentielle . Le protocole exige ADN purifié , la Taq polymérase , bases appelées désoxynucléotides et petits brins d'ADN pour amorcer la zone désignée . Le mélange réactionnel est placé dans un thermocycleur , un instrument capable de brusques changements de température . Chauffer le mélange à 95 degrés Celsius sépare l'ADN double brin , puis refroidi à 48 degrés afin amorces peuvent s'asseoir , ou recuit , de bases correspondant . La température est augmentée à 72 degrés lorsque la Taq polymérase assemble désoxynucléotides , poste appelé , dans une nouvelle copie de l'ADN .

ADN génétique séquençage
données de séquençage apparaît comme couleur bandes désignant bases de l'ADN .

séquençage automatisé est utilisé pour déterminer la séquence de bases exacte et comparer normale avec de l'ADN anormal . Le protocole ajoute des didésoxynucléotides marqués par fluorescence , ou des ddNTP , à des réactions de PCR normaux , ce qui stoppe l'extension aléatoire de fragments d'ADN . Les produits sont différents fragments d'ADN par une seule base. Chaque type de base a une couleur différente . Les produits finaux sont chargés sur un séquenceur automatisé , un instrument destiné à séparer des fragments de la taille d'un polymère utilisant un courant électrique . Lorsque les fragments n'atteignent le poste de polymère , un appareil photo numérique enregistre la couleur de base et envoie les données à l'ordinateur pour analyse .
Génotypage et empreintes d'ADN
empreintes génétiques est utilisé pour identifier l'homme reste .

génotypage est un procédé qui compare des petits segments d'un génome d'un organisme à un autre . Le but est de détecter de petites différences dans la taille des fragments PCR résultant de changements de bases normales ou accidentelles de l'ADN . La conception du protocole commence par PCR de base en utilisant une amorce marquée par fluorescence pour la détection sur des séquenceurs automatisés. Produits marqués sont séparés par taille et enregistrées par l'appareil photo numérique à un ordinateur pour analyse. Protocoles de génotypage sont conçus pour l'identification médico-légale , empreintes génétiques et de la paternité ou l'identification des anomalies génétiques qui conduisent à la maladie .