Comment faire des plaques de gélose LB
agar-agar est une substance gélatineuse , fabriqué à partir d' algues rouges et utilisé pour une variété de fins . Une de ses utilisations courantes est comme milieu de culture pour les bactéries. LB agar est gélose nutritive qui a été combiné avec le bouillon de lysogénie ( LB ) . C'est une erreur communément répandue que LB est synonyme de Luria -Bertani . Cependant , son inventeur , Giuseppe Bertani , déclare dans son article " Lysogénie au milieu du XXe siècle : P1 , P2 , et d'autres systèmes expérimentaux , " que les initiales étaient toujours destinés à tenir pour bouillon de lysogénie , pas son nom et celui de son coresearcher , Salvador Luria . LB agar est polyvalent et assez simple à réaliser . Choses que vous devezPour 1 litre de milieu fini : Photos échelle et papiers ou des plateaux de pesage
1 -L cylindre gradué Photos 1 L d'eau distillée ou déminéralisée Photos 2 -L Erlenmeyer de
5 g d'extrait de levure
5 g de sel de table non iodé
gants de cuisine imperméables
autoclave ou autocuiseur
plaques de Pétri
Afficher Instructions
1 Utilisez un Erlenmeyer qui contient deux fois le volume du milieu que vous souhaitez préparer.
Placez la tryptone , extrait de levure et le sel dans l'erlenmeyer .
2 Portez une attention particulière à la pression de l'autoclave ou autocuiseur lors de la stérilisation .
Ajouter l'eau distillée ou déminéralisée et monsieur ou agiter pour dissoudre la plupart des ingrédients secs .
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Ajouter l'agar-agar et continuer à agiter ou remuer. Tout l'agar ne se dissout pas , mais il est important que vous obtenez la plus grande partie en solution . Éviter de grosses touffes de non dissous agar s'installer dans le fond de votre ballon .
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Sceller l'ouverture de la fiole dans une feuille .
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Placer la fiole dans un autoclave contenant sécuritaire .
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Verser environ 1 cm d'eau dans le récipient .
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Mettez le récipient et ballon dans l'autoclave . Réglez l' autoclave pendant un cycle de stérilisation de liquide et pendant au moins 20 minutes. Si vous utilisez un autocuiseur pour la stérilisation , passez à l'étape 8 . Sinon , passez à l'étape 10 .
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Si vous utilisez un autocuiseur , placez une petite quantité d'eau dans le cuiseur et placer le ballon dans l' eau . Ne pas tenter de stériliser plus de 250 ml à la fois en utilisant cette méthode .
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Apportez l'autocuiseur à environ 20 psi et stériliser pendant environ 30 minutes .
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Retirer le ballon de l'autoclave ou autocuiseur, en prenant soin que le ballon sera très chaud .
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Agiter le flacon doucement une fois la stérilisation terminée . Cela distribuer la gélose plus uniformément tout au long de votre solution .
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Placez le ballon sur une surface appropriée et laisser refroidir un peu . Si vous avez préparé une L ou plus de moyen , lui donner un tourbillon doux tous les 10 à 20 minutes . Vous serez en mesure de dire que le milieu ait suffisamment refroidi si vous pouvez maintenir le dos de vos doigts sur le flacon pendant environ 2 secondes sans qu'il soit trop chaud au toucher . Attendez environ 15 à 20 minutes avant d'essayer cela.
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Placez une boîte de Pétri sur une surface plane . Soulevez doucement le couvercle à un angle , de sorte que plus de la boîte est laissée couverte . Ne pas soulever le couvercle droit de la plaque .
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Verser le milieu du ballon dans la boîte de Pétri jusqu'à ce que le plat est à moitié plein .
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remplacer immédiatement le couvercle , déplacer la plaque de côté et passer à la suivante jusqu'à ce que toutes les plaques souhaités ont été remplis . Les plaques termineront leur solidification en 30 minutes environ .
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Placez les boîtes de Pétri dans le sac stérile dans lequel ils sont arrivés ou un autre récipient adapté , stérile si vous n'êtes pas en leur inoculant tout de suite. Fermer le récipient pour conserver l'humidité . Étiqueter les plaques si désiré. Si vous stockez les plaques , ils doivent être conservés à une température d'environ 39 à 40 degrés F.
