Les protocoles de purification MBP

MBP ou la protéine de liaison au maltose est trouvé dans la bactérie Escherichia coli , qui fait partie de la flore intestinale de l' homme et des animaux . La purification de MBP consiste en une série de procédures visant à séparer les constituants de la protéine . En biologie moléculaire , de la purification MBP est un processus vital pour l'étude de la structure et la fonction de cette protéine . Protocoles de purification comprennent MBP MBP protéines fusionnées purification à petite échelle de fusion MBP et le maltose tag purification de liaison de protéine de fusion . MBP Fondus protéines Purification

cours de ce protocole , les techniciens laver 20 ml de la résine d'amylose de polymère avec une solution atris à pH 7,4 , chlorure de sodium , mercaptoéthanol ( ME ) et de l'acide éthylènediaminetétraacétique (EDTA ) , selon des protocoles online. Des échantillons de cellules sont ajoutés, centrifugés et analysés par électrophorèse sur gel . Les échantillons sont également analysés dans un chromatographe , où les techniciens éluat ou observent les constituants de la solution en passant par la colonne de chromatographie .
Petite échelle fusion MBP Protein Purification

Selon l'Université hébraïque de Jérusalem , les biologistes utilisent le isopropylique de réactif bD- 1 -thiogalactopyranoside (IPTG ) , culture de cellule de filage pendant 10 min à 8000 tours par minute à 39,2 degrés Fahrenheit . Plus tard , ils enlèvent liquide surnageant et mélanger tampon PBS froid à l'échantillon, qui est divisé en plusieurs tubes et centrifugé à nouveau. Les échantillons sont ensuite conservés à -112 degrés Fahrenheit pour l'analyse postérieure .

Maltose Binding Protein Fusion Tag purification

marqueurs d'affinité sont génétiquement molécules utilisées en biologie moléculaire conçus pour détecter et purifier des protéines . Ce protocole est un ensemble complexe de procédures divisé en trois étapes , qui comprennent la construction de la protéine marqueur polyhistidine ( HisMBP ); une expérience pilote pour évaluer la solubilité de la protéine; et la purification à grande échelle des molécules MBP , selon Nature Protocols . Mis à part les échantillons de E. coli , les techniciens utilisent l'ampicilline , à la kanamycine , de l'IPTG , anhydrotétracycline , le monohydrate de glucose , un tampon de lyse cellulaire, l'ADN polymerase , des amorces de PCR , Tris- acétate -EDTA et du bromure d'éthidium .

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