Protocole de dosage de liaison compétitive

Le test de liaison compétitive est un essai qui détermine la capacité de liaison de protéines ou de produits chimiques pour des protéines spécialisées trouvés sur une surface cellulaire , appelés récepteurs . La méthode est souvent utilisée dans la recherche médicale , mais est également capable de déterminer quels médicaments se lient aux récepteurs et de modifier l'activité du récepteur , qui à son tour peut modifier le comportement de la cellule. Préparation des cellules

Re - suspendre les cellules dans le phosphate glacée solution saline tamponnée (PBS ) . Mesurer la concentration de protéine pour confirmer les niveaux de protéines égales en utilisant un dosage de protéines disponible dans le commerce spécialisé .
Essai

Ajouter une protéine de la radioactivité marqué connu pour se lier au récepteur , le ligand , à la suspension de cellules ou de tissus. Ajouter le concurrent qui est le médicament de test ou d'une protéine à l'étude et à incuber avec le ligand radioactif et la suspension de cellules. Une gamme de concentrations du médicament de test doit être étudiée . Après incubation , le ligand lié et non lié séparée et mesurer la radioactivité .

Analyse des données

La mesure habituelle à déterminer est la moitié de la concentration maximale qui inhibe le récepteur autrement connu sous le nom IC50 . Ceci est calculé en reportant les concentrations sur une échelle logarithmique sur l'axe des X d'un graphe tandis que l'axe des Y représente le pourcentage d'inhibition; une courbe sigmoïde , qui est une forme en S , doit être généré . La CI50 est le point d'inhibition de 50 pour cent , et la concentration correspondant peut être lu à partir du graphique .