HPLC Technique

CLHP signifie Chromatographie liquide haute performance , une procédure d' analyse qualitative et quantitative standard utilisé dans les laboratoires d'analyse. HPLC est fiable et reproductible , ce qui rend la technique préférée pour séparer , identifier et quantifier les molécules à partir de mélanges complexes de deux composants chimiques et biologiques . Quatre composants

La technique HPLC contient quatre composants principaux . Tout d'abord, le système de livraison de solvant (phase mobile) , qui porte les échantillons à travers la colonne , est important, car la polarité affecte la capacité du système pour séparer les molécules . La colonne de chromatographie est généralement une colonne verticale en verre qui est rempli avec un adsorbant . En second lieu, l'adsorbant ( également connu en tant que phase stationnaire , étant donné qu'il ne se déplace pas ) est communément gel de silice ou de l'alumine . Troisièmement, le système d'introduction d'échantillon est constitué d' une sorte de l'orifice d'injection pour introduire l' échantillon à analyser dans le système de distribution de solvant . La quatrième composante est le détecteur .

Détecteurs

Le type de détecteur utilisé dépend du type de l'échantillon, les techniciens sont en cours d'exécution et quelles molécules ils tentent d'isoler . Les critères utilisés par le technicien lors du choix d' un détecteur comprennent sélectivité , le rapport signal -sur-bruit , limite de détection , la gamme linéaire , constante de temps , la dérive et le volume de la cellule. Détecteurs couramment utilisés comprennent des détecteurs de rayonnement ultraviolet visible , spectromètres de masse , des indices de réfraction , détecteurs de fluorescence ou de dispositifs de diffusion de la lumière par évaporation .

Procédure

Allumez le détecteur , les pompes ( qui sont utilisés pour ajouter de la pression pour déplacer la phase mobile à travers la phase stationnaire ) , et l'ordinateur qui va enregistrer et imprimer le chromatogramme . Choisissez les programmes appropriés en vue de recueillir les données souhaitées . Injecter l'échantillon dans l'orifice d' injection. Gardez un oeil sur la pression . Chaque type de colonne a une pression maximale; ne pas dépasser cette séparation ou ne se produira pas . Imprimez le chromatogramme et analyser les résultats . A la fin de chaque course , il est important de rincer l'orifice d'injection pour éviter l'accumulation , ce qui peut créer des blocages .

Types

chromatographie d'interaction hydrophile utilise une polaire lié phase stationnaire et une phase mobile non polaire miscible à l'eau pour séparer les molécules en fonction de la polarité. Cette technique a la capacité de séparer des échantillons acides, basiques et neutres dans une chromatographie en phase chromatogram.Normal unique utilise une phase stationnaire polaire et une phase mobile non polaire , non aqueux pour séparer les isomères de structure (molécules avec la même formule moléculaire qui ont des atomes liés ensemble en différentes façons ) Chromatographie en phase. inversé est le type de CLHP plus largement utilisé . Il utilise une phase stationnaire non polaire et une phase mobile peu polaire aqueuse . Cette méthode est couramment utilisée par les entreprises pharmaceutiques pour qualifier les médicaments avant la chromatographie d'exclusion release.Size sépare les molécules selon leur taille , et peut également déterminer la structure de la Chromatographie d'échange proteins.Ion est basé sur l'attraction entre les ions dans le soluté et les sites chargés lié sur la phase stationnaire .
Utilise

HPLC est utile dans une variété d'applications . Il peut être utilisé pour analyser les produits pharmaceutiques , ce qui est utile dans la recherche de nouveaux produits pharmaceutiques , ainsi que la purification de ceux qui existent déjà . Il est également utilisé pour analyser des liquides biologiques , des pesticides , des explosifs et d'autres matériaux. Bien que c'est une technique populaire pour la recherche biomédicale , biochimique et pharmaceutique , il est également utilisé dans les cosmétiques , la nourriture, industries de l'environnement et de l'énergie .