Les méthodes de cytométrie en flux Essentiels
La cytométrie en flux implique le principe de la focalisation hydrodynamique , en utilisant une source de lumière d'excitation telle qu'un laser , pour mesurer et analyser les caractéristiques physiques des particules individuelles. La cytométrie en flux est principalement appliquée à l'analyse de cellules , et les propriétés analysées comprennent la taille de la cellule , la granularité et l'intensité de fluorescence. Méthodes de détection essentielles utilisées dans l'écoulement comprennent cytométrie lumière , la lumière et la fluorescence diffusée vers l'avant côté diffusée . Cytomètre de flux
un cytomètre en flux est comprennent fluidique, l' optique et un système électronique . Le système fluidique est responsable du transport du courant d'échantillon pour le faisceau laser pour l'interrogation . Le système optique contient des lasers et des filtres optiques qui illuminent les échantillons et les signaux lumineux directs aux détecteurs pertinents . Cette lumière détectée est convertie en signaux électroniques par le système électronique , l'interprétation par l'ordinateur .
Avant - Lumière dispersée
de lumière diffractée dispersés dans une direction vers l'avant est détecté d'environ 20 degrés de l'axe du faisceau laser par une photodiode dite voie diffusée vers l'avant (FSC) . La lumière diffusée vers l'avant est directement proportionnelle à la surface des particules , et elle est utilisée comme un indicateur de la taille des cellules et de faire la distinction entre des cellules vivantes et mortes. Grâce à ces caractéristiques , le FSC est appliqué à l'immunophénotypage comme un déclencheur de traitement du signal.
Côté lumineux
de lumière latérale dispersées dispersés se réfère à la lumière réfractée à n'importe quelle interface cellulaire , qui est mesurée à environ 90 degrés par rapport à l'axe du faisceau laser par le côté canal de diffusion par ( SSC ) , puis redirigé vers le détecteur concerné par un diviseur de faisceau . La lumière diffusée latérale est à peu près équivalente à la granularité de la cellule ou de la complexité interne , et est utilisé pour déterminer le contenu des cellules granulaires . Côté et la lumière diffusée vers l'avant sont utilisés en combinaison pour faire la distinction entre différents types de cellules .
Fluorescence
fluorescence fournit des informations à la fois quantitatives et qualitatives sur les molécules intracellulaires tels que les cytokines et ADN , et la surface cellulaire des récepteurs , en utilisant des étiquettes fluorochrome et de mesure à différentes longueurs d'onde . Chaque étiquette fluorochrome a une longueur d'onde spécifique au rang de laquelle la lumière est absorbée appelé le spectre d'absorption . Fonctions de fluorescence comme un photon de lumière est émis par un électron excité après absorption de la lumière .
