Différence entre directe et indirecte ELISA

Un dosage immuno-enzymatique (ELISA) implique la réaction d' un complexe anticorps - enzyme avec un antigène ou un anticorps maintenue immobile sur une surface solide . Lors de l'incubation de l'enzyme conjuguée avec un substrat approprié , un produit est formé . La formation d'un produit permet de détecter la présence de l'antigène ou de l'anticorps et de la quantité fournit une mesure de la quantité de la réaction antigène-anticorps qui s'est produite. Le test ELISA peut être réalisée sous deux formes : directe et indirecte . Format du test

Dans le test ELISA direct , un anticorps primaire est maintenu sur les murs d'une microplaque. Lorsque l'échantillon suspecté de contenir l'antigène est ajouté , il existe une réaction antigène-anticorps . Ensuite, un anticorps secondaire lié à une enzyme qui est capable de réagir avec l'antigène est ajouté. Si l'antigène est présent dans l'échantillon, il se lie à cet anticorps lié à une enzyme . Quand un substrat incolore est ajoutée , si une couleur se développe, il indique la présence de l'antigène . Dans le test ELISA indirect , l'antigène est maintenue sur les parois de la plaque de microtitration . Quand un échantillon suspecté de contenir des anticorps est ajouté , une réaction antigène -anticorps se produit . Ensuite, un anticorps secondaire lié à une enzyme capable de réagir avec la zone non liée de l'anticorps est ajouté. Lorsque le substrat incolore est ajouté, il conduit au développement de la couleur si l'échantillon utilisé contient des anticorps .
Facilité d' essais

Une large gamme d'anticorps secondaires marqués sont commercialement disponible . En outre, il est possible de créer plusieurs anticorps primaires dans une espèce donnée et utiliser le même anticorps secondaire pour la détection. Cela rend le test ELISA indirect facile à réaliser . Dans l' ELISA direct , les anticorps primaires doivent être préparés spécifiquement pour réagir avec l'antigène spécifique soupçonné d'être présent dans l'échantillon. Cela rend l' ELISA direct désavantageuse par rapport à l'épreuve indirecte .

Rapidité des tests

Le test ELISA direct est rapide en comparaison à l'épreuve indirecte, car il utilise seulement un seul anticorps . Le test ELISA indirecte nécessite une étape supplémentaire d'incubation avec un second anticorps au cours de la procédure de test , ce qui entraîne un retard dans l'obtention des résultats .
Sensibilité

Le test ELISA direct est moins sensible que la forme indirecte de l'essai , car il est beaucoup moins amplification du signal . En outre, l'étiquetage de l'anticorps primaire avec une enzyme peut nuire à son profil de immonoreactivity . Dans le cas de l' ELISA indirect , l'anticorps primaire n'est pas marqué et, par conséquent , il conserve son immunoréactivité . En outre, chaque anticorps primaire a de nombreux épitopes qui peuvent se lier avec l'anticorps secondaire; ce qui permet l'amplification du signal , l'amélioration de la sensibilité de la méthode . Cependant, il existe un risque de réactivité croisée entre l'antigène et l'anticorps secondaire , ce qui conduit à une erreur dans les résultats . Il n'y a pas cette possibilité dans la méthode ELISA directe .