Comment comparer les méthodes d'électrophorèse de gel d'ADN
électrophorèse de gel est une technique classique de séparation de l'ADN , de l'ARN ou de la protéine à travers un gel à l'aide d'un courant électrique . Il utilise la charge électrique des molécules de les séparer en un gel en utilisant un courant électrique. Agarose
gel d'agarose est la méthode la plus courante pour la visualisation de l'ADN . Différents pourcentages d' agarose peuvent être utilisées en fonction de la taille de l' ADN devant être visualisée. Un faible pourcentage d' agarose , tel que 0,7 pour cent , a la résolution de visualiser grands fragments d'ADN . Un pourcentage plus élevé , tel que de 2 pour cent , est souvent utilisé pour visualiser de petits fragments d' ADN . Pour visualiser l'ADN , le bromure d'éthidium est souvent utilisé comme il s'intercale avec l'ADN et fluorescence à la lumière UV .
Polyacrylamide
Les gels de polyacrylamide sont utilisés à des fragments d'ADN séparés aussi petites que 10 paires de bases jusqu'à 1 kb. Ces gels ont un petit intervalle de séparation mais avec une haute résolution . Cependant, ils sont aussi plus compliqué à préparer. Il est également possible de charger de grandes quantités d' ADN , sans affecter la résolution. Comme agarose , le bromure d'éthidium est souvent utilisé pour visualiser les fragments d'ADN , mais polyacrylamide peut étancher la fluorescence , ce qui rend difficile de visualiser de petites quantités d' ADN .
Pulse - champ et Photos
Cette forme de l'électrophorèse est utilisée pour séparer les grandes molécules d'ADN et est souvent utilisé pour le génotypage . Grands fragments d'ADN migrent à une vitesse similaire . Il peut être difficile , donc , pour résoudre différentes bandes . Électrophorèse en champ puisé alternance du champ électrique. Cela permet une meilleure séparation et la résolution de l'ADN .
Capillaire
électrophorèse capillaire est une méthode rapide et sensible pour la séparation de l'ADN . De petites quantités d' ADN peuvent être résolus. L'ADN peut être visualisé avec un marquage fluorescent ou à la lumière UV .
Dénaturation
La séparation de l'ADN peut être compliquée par sa structure . Il est possible en utilisant de l'urée et de formamide de détruire la structure en abaissant le point de fusion de l'ADN . Il peut être utilisé dans les deux gels d'agarose et de polyacrylamide .
Considérations
La méthode de l'électrophorèse choisi dépendra de la taille des fragments d'ADN à séparer. Comment l'ADN sera utilisé après la séparation permettra également de déterminer la méthode finale .
