Bases PCR
Polymerase Chain Reaction ( PCR ) est une méthode de réplication de l'ADN . Le procédé est nommé d'après l'ADN polymérase , une enzyme utilisée pour catalyser le processus de replication de l'ADN . Kary Mullis a développé la technique en 1984 et a reçu le prix Nobel de chimie pour ses travaux en 1993 . Applications de PCR
applications courantes de PCR sont empreintes génétiques ( dans lequel des fragments d'ADN sont isolés et comparés données existantes ) , l'analyse des quantités d'échantillons très petits ( qui permet aux scientifiques de reconstituer organismes disparus et personnages historiques décédés ) et le diagnostic de la maladie (y compris l'ADN viral et recherche sur le cancer ) .
Composants PCR Photos
composants et des réactifs d'une réaction de PCR nécessaires sont : l'ADN génomique (le modèle à reproduire ); deux amorces ( une à l'avant et une marche arrière ) complémentaire de la séquence de matrice d'ADN; un cocktail de réaction ( y compris la Taq polymerase et une solution tampon qui fournit un environnement viable dans lequel la réaction se produit ); et le substrat de l'enzyme Taq ( nucléotides qui vous aideront à «construire » les brins individuels ) .
étapes de PCR
Les étapes de la réaction sont : dénaturation ( au cours de laquelle la température est élevée à séparer les brins de la matrice d'ADN ); Hybridation de l'amorce ( au cours de laquelle la température est refroidie à encourager séquences d'amorces flottant librement à adhérer aux brins de la matrice d'isolement de l'ADN ); et d'extension ( au cours de laquelle la polymérase Taq adhère à l'amorce et utilise nucléotides libres flottant à reproduire chaque isolé modèle de brin d'ADN ) . La répétition de ce processus plusieurs fois va isoler chaque séquence répliquée à partir de sa matrice d'ADN d'origine . Chaque répétition augmente de manière exponentielle la quantité de l'ADN répliqué jusqu'à ce qu'il y est une quantité suffisante pour l'expérience souhaitée. Pour la température optimale et d'autres conditions , voir « Conception PCR programmes" de l'Université de Yale dans les ressources ci-dessous.
Étapes de PCR
La réaction peut également être décrit en trois étapes : Amplification ( au cours de laquelle l'ADN est répliqué de façon exponentielle ); Level -Off ( au cours de laquelle la polymérase Taq perd son activité ); et plateau ( à laquelle pas plus de produit peut être produit dans la réaction en cours) . Pour une démonstration interactive de la réaction de PCR , voir Université de " PCR laboratoire virtuel " de l'Utah dans les ressources ci-dessous.
