Les protocoles pour la coloration de Hoechst

Les taches de Hoechst sont des colorants fluorescents utilisés pour l'ADN et de l'ARN de marquage à travers la microscopie à fluorescence et des techniques de cytométrie en flux . Hoechst 33258 et Hoechst 33342 sont les plus utilisées de ces taches . Ils ont la capacité de se lier à des molécules d'ADN , ce qui provoque le noyau et les mitochondries apparaissent fluorescent sous lumière ultraviolette . Protocoles de coloration de Hoechst sont de pratique courante dans les laboratoires biotechnologiques et génétique , et comprennent des techniques de coloration des cellules à l'aide de deux Hoechst 33258 et Hoechst 33342 . Hoechst 33342 HSC coloration et de la tige protocole de purification cellulaire

Ce protocole est utilisé pour colorer les cellules de la moelle osseuse des souris . Les techniciens préparent échantillon de moelle osseuse avec une solution HBSS + sel , tampon HEPES et du sérum de veau foetal. Ils tournent la solution et ajouter à un milieu DMEM préchauffé . Hoechst tache est alors ajouté . La solution est placée dans un bain d'eau de 98,6 degrés Fahrenheit pendant exactement 90 minutes , rapporte le département d'immunologie de l'Université de Pittsburgh . Segments d'ADN apparaissent fluorescents sous un cytomètre .
Hoechst 33342 ADN coloration

Pendant ce protocole , les techniciens suspendus Hoechst 33342 tache à l'eau distillée, ajouter 2 pour cent de sérum de veau foetal à l'échantillon de cellules , en maintenant le pH à 7,2 à l'aide d' une solution tampon . Les cellules sont ensuite incubées à 98,6 degrés F pendant une heure, et analysés immédiatement avec une pièce d'équipement appelé cytomètre .

Souillé ADN est alors visible et fluorescent , selon l'Université du Michigan Health System .


détection ADN en utilisant la liaison à l'ADN Fluorochrome Hoechst 33258

Cette protocoles utilisés une pièce d'équipement appelé spectrophotomètre pour analyser l'ADN et de l'ARN segments . Les techniciens utilisent Hoechst 33258 travail des échantillons d'ADN de thymus de veau et solution . Ils font également une solution séparée en utilisant l'échantillon d'ADN et d' un produit chimique appelé bromure d'éthidium . Plus tard , ils comparent les résultats de la coloration de la cellule dans les deux milieux , à l'aide d'un spectrophotomètre , selon les protocoles actuels en cytométrie .