Quelle est la meilleure façon de déterminer quand la solution de lait devient claire dans une expérience sur la trypsine ?
Voici une procédure améliorée pour déterminer le point final de l’expérience sur la trypsine à l’aide d’un spectrophotomètre :
Matériaux :
- Solution de trypsine
- Solution de substrat de caséine
- Solution d'hydroxyde de sodium (NaOH) (0,1 M)
- Spectrophotomètre
- Cuvettes
Procédure :
1. Préparer le mélange réactionnel :
- Dans une cuvette, mélanger un volume spécifique de solution de substrat de caséine (par exemple 1 mL) avec un volume approprié de solution de trypsine (par exemple 0,1 mL).
- Incuber le mélange à une température appropriée (par exemple 37°C) pendant la durée souhaitée (par exemple plusieurs minutes).
2. Arrêtez la réaction :
- À des intervalles de temps précis (par exemple toutes les minutes), prélevez un petit volume du mélange réactionnel (par exemple 0,1 ml) et transférez-le dans une cuvette séparée.
- Ajouter immédiatement un volume suffisant de solution de soude (par exemple 1 mL) pour arrêter la réaction.
3. Mesurer l'absorbance :
- Utilisez le spectrophotomètre pour mesurer l’absorbance de chaque mélange réactionnel arrêté à une longueur d’onde spécifique (par exemple 440 nm).
4. Tracer l'absorbance :
- Tracez un graphique avec le temps (axe des x) et l'absorbance (axe des y).
5. Déterminez le point de terminaison :
- Analyser les valeurs d'absorbance au fil du temps. Le point final est le moment auquel l’absorbance atteint un plateau ou présente une diminution significative, indiquant une hydrolyse importante de la caséine.
Cette méthode fournit une détermination plus objective et quantitative du point final par rapport à l'observation visuelle de la clarification de la solution, car elle repose sur la mesure du changement d'absorbance dû à la libération de peptides et d'acides aminés plus petits pendant l'hydrolyse de la caséine.
