Comment mesurer les concentrations de catalase

catalase est un catalyseur ( organique ) biologique . Cette enzyme est l'un des catalyseurs les plus puissants connus et a des effets bénéfiques sur le corps humain et est essentielle à la vie. La catalase agit comme un catalyseur pour accélérer la décomposition du peroxyde d'hydrogène. Le peroxyde d'hydrogène est un sous-produit métabolique qui est toxique pour les cellules s'il n'est pas retiré . Catalase aide à décomposer le peroxyde d'hydrogène en eau et oxygène . La catalase oxydant contribue également à d'autres toxines telles que les phénols, l'acide formique , le formaldéhyde et les alcools. Choses que vous devez
deux 110 ml de chromogène dans un tampon phosphate 300 Photos substrat de pi - 30 % de peroxyde d'hydrogène
400 μL.HRP - peroxydase de raifort dans 60 ml de phosphate de tampon phosphate tampon
250 mL de diluant échantillon tensioactif dans deux 30 ml substrat diluant tampon phosphate de tampon phosphate de deux 30 ml de réactif d'arrêt - azoture de sodium Deux flacons de 160 spectrophotomètre
U /flacon norme catalase
10 ul pipettes réglables Photos 1 cm de longueur de chemin cuves spectrophotométriques
1,5 microtubes polypropylène mL avec bouchon
tubes à essai - 12x75 mm (2,5 ml chacun) Photos minuterie Photos de l'eau déminéralisée

Montrer Instructions
Le 1

Préparer le stock de catalase que vous allez mesurer en ajoutant 200 microlitres ( ul ) de l'eau déminéralisée pour les concentrations de catalase dans 50 millilitres ( ml ) flacons . Le niveau de la concentration de catalese devrait être de 160 unités par millilitre ( UI /ml) .
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Ajouter 30 ul de dilution de la catalase dans des tubes . Ajouter 500 ul de substrat ( peroxyde d'hydrogène - 10 mm H2O2) dans chaque tube. Faites attention de ne pas éclabousser le peroxyde d'hydrogène en travaillant avec elle .
3

Incuber chaque tube pendant une minute à la température ambiante .
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Ajouter 500 μ L de réactif dans chaque flacon . Cap chaque flacon et mélanger en inversant le flacon de haut en bas . Ne pas agiter le mélange , agiter le flacon ou remuer avec un objet .
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Ajouter 20 ul de chaque mélange réactionnel dans les tubes à essai . Ajouter 2 ml de réactif de HRP dans chaque tube à essai . Encore une fois, mélanger la solution en inversant les tubes à essai à plusieurs reprises .
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Incuber la solution à nouveau , cette fois pendant 10 minutes à température ambiante .
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Lire l'absorbance niveau de la solution avec un spectrophotomètre. Les mesures du spectrophotomètre lumière des longueurs d'onde de déterminer exactement quelles substances sont présentes et ainsi que les concentrations . Cette méthode permet de fournir une mesure précise de la concentration de catalase . L'information est utile dans le contexte de l'interaction de la catalase avec du peroxyde d' hydrogène , comme dans cette expérience , et que se fait naturellement dans le corps humain .