Comment la quantité de digestion de BAPNA varie-t-elle avec le temps ?

La digestion du BAPNA (Benzoyl-DL-arginine-p-nitroanilide) par la trypsine suit une cinétique enzymatique typique de Michaelis-Menten. Le taux de digestion augmente initialement avec le temps, à mesure que davantage de molécules d’enzymes s’engagent dans la réaction. Cependant, à mesure que la concentration en substrat diminue avec le temps, le taux de digestion ralentit. La relation entre la quantité de BAPNA digérée et le temps peut être décrite par l’équation suivante :

[BAPNA]t =[BAPNA]0 - k[E][BAPNA]0*t

Où:

- [BAPNA]t :Quantité de BAPNA digérée au temps t

- [BAPNA]0 :Concentration initiale de BAPNA

- k :Constante de vitesse pour la réaction

- [E] :Concentration de trypsine

- t :Heure

Le tracé de [BAPNA]t en fonction de t montre généralement une courbe hyperbolique. La phase linéaire initiale de la courbe représente la période pendant laquelle la vitesse de réaction est constante et proportionnelle à la concentration en enzyme. Au fur et à mesure que la réaction progresse, la courbe se stabilise en raison de l'épuisement du substrat et de la diminution du taux de digestion.

En mesurant la vitesse initiale (Vo) de la réaction et en déterminant la constante de Michaelis-Menten (Km) par analyse graphique (par exemple, tracés de Lineweaver-Burk ou de Hanes-Woolf), il est possible de caractériser la cinétique de l'enzyme et d'obtenir des informations sur le catalyseur. efficacité et affinité du substrat de la trypsine pour le BAPNA.